长链非编码RNA BANCR在胃癌细胞中的表达变化及对AGS细胞增殖、迁移能力的影响

马松林，徐丹，王剑，孙圣斌，吴杰

(华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院，武汉430000)

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，易转移复发，患者5年总生存率不到30%[1～3]。长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA[4]。研究[5]表明，lncRNA可在肿瘤的多种生物学过程如增殖、凋亡和免疫应答等方面起关键作用。lncRNA BANCR与多种肿瘤细胞的生长和转移相关，包括视网膜细胞瘤[6]、肺癌[7]、黑色素瘤[8]等，但其在胃癌中的作用鲜有报道。本研究观察了lncRNA BANCR在胃癌细胞中的表达变化，及其对细胞增殖、迁移能力的影响，并探讨其机制。

1 材料与方法

1.1 细胞与主要实验材料 胃癌细胞AGS、BSG823、MGC-803、Hs746T及正常胃黏膜上皮细胞GES-1均购自美国ATCC细胞库。核转录因子NF-κB1两个亚基p50、p105及磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)一抗均购自Invitrogen公司，二抗购自美国BD公司。RPMI1640培养基、RT-PCR仪购自美国BD公司。HBS-1096B酶标仪购自南京德铁实验设备有限公司。蛋白免疫印迹电泳设备购自美国Bio Rad公司。

1.2 胃癌细胞中lncRNA BANCR检测 AGS、BSG823、MGC-803、Hs746T细胞及GES-1细胞均接种于RPMI1640培养基，于37 ℃、5%CO2培养箱中培养，48 h后消化传代。提取并分离细胞的RNA，采用NanoDrop1000分光光度计对RNA的浓度进行测定，采用RT-PCR法检测细胞中的lncRNA BANCR。lncRNA BANCR上游引物序列为5′-GAATTGCGTCATTTAAAGCCTAGTT-3′，下游引物序列为5′-GTTTCATCCTACCACTCCCAATTAAT-3′；内参GAPDH上游引物序列为5′-TGGCACCCAGCACAATGAA-3′，下游引物序列为3′-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-5′。以2-ΔΔCt表示lncRNA BANCR的相对表达量。

1.3 lncRNA BANCR表达变化对AGS细胞增殖、迁移能力的影响观察

1.3.1 AGS细胞分组及lncRNA BANCR沉默方法 取AGS细胞分成LV-BANCR shRNA组、LV-NC组及BLANK组，用Lipofectamine2000分别转染pcDNA3.1-LV-BANCR shRNA(上游引物序列为5′-GGTCUTCTCUTTGCTCTUTCC-3′，下游引物序列为5′-GGUUUGUGCUUUGUGUUGUCC-3′)及pcDNA3.1-LV-NC shRNA(上游引物序列为5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′，下游引物序列为5′-UCGTGUCUCGTTCGGUGUUTT-3′)，BLANK组加入PBS。转染浓度为300 nmol/孔。转染48 h后，LV-BANCR shRNA组、LV-NC组、BLANK组lncRNA BANCR相对表达量分别为0.13±0.06、1.00±0.05、1.00±0.03，LV-BANCR shRNA组lncRNA BANCR相对表达量低于LV-NC组和BLANK组，提示转染成功，可进行下一步实验。……