皮肤组织蛋白酶D表达与晚期糖基化终末产物堆积的相关性研究

黄云芬 许庆芳 黎钰莹 许新雅 谢阳 夏悦 万苗坚 陆春 赖维

510630广州，中山大学附属第三医院皮肤科

晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products，AGE）是蛋白质、脂类、核酸等大分子物质的游离氨基与还原糖通过非酶糖化反应生成不可逆及不易降解的大分子棕色产物［1］。AGE影响人体蛋白质、脂类、核酸等物质结构和功能，是衰老相关疾病的重要病理特征。新近发现AGE在光老化皮肤中堆积，在光老化中起重要作用［2］。组织蛋白酶D（cathepsin D，CatD）是降解AGE的重要蛋白酶之一［3］，但它是否在光老化皮肤AGE降解及堆积中起作用，目前还不清楚。本研究采用免疫组化和免疫荧光双染法，检测并比较CatD和AGE在不同年龄组曝光和非曝光部位皮肤中的表达，并对它们之间的相关性进行分析，初步探讨CatD在光老化皮肤AGE降解及堆积中的作用。

材料与方法

一、实验材料

1.皮肤组织标本来源：皮肤组织标本均来自中山大学附属第三医院皮肤科病理活检术及皮肤外科手术切除的皮肤组织，患者均未患糖尿病。如为非肿瘤良性病变，则切取皮损周边正常皮肤；如为可疑恶性肿瘤手术，先经术中冰冻切片检查确认肿瘤边界后，再切取周边未受累正常皮肤。本研究经过中山大学附属第三医院医学伦理委员会批准（［2017］2-11），所有提供标本的患者均签署知情同意书。

2.试剂和仪器：一抗兔抗人CatD-IgG抗体、鼠抗人AGE-IgG抗体（美国Abcam公司），驴抗鼠二抗和羊抗兔二抗、Hoechst33342染料（美国Life Technology公司）。

二、方法

1.免疫组化染色检测CatD和AGE在各年龄段曝光和非曝光部位皮肤组织中的表达：受试者分为15～20岁、35～40岁、55～60岁、75～80岁4个年龄段，每年龄段又分为非曝光组和曝光组，共8组，每组6份标本。……