牦牛Smad 4基因3′UTR区双荧光素酶载体构建及与bta-miR-146a的靶向验证

牛家强,王玉恒,索朗斯珠,强巴央宗,徐业芬*，郭 敏,程玲华,杨士承

(1.西藏农牧学院动物科学学院，林芝 860000； 2.西藏农牧学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室，林芝 860000； 3.中国农业大学动物科技学院，北京 100193)

微小RNA(microRNA, miRNA)是一类内源性非蛋白质编码的RNA分子，约含有18～24个核苷酸，其一般通过作用于靶基因的3′UTR引起靶基因降解或者翻译受阻，从而调控基因表达[1-2]。1993年Lee等[3]在秀丽隐杆线虫中首次发现微小RNA-Lin-4，它能通过与其3′UTR结合，调控线虫细胞的发育。从此越来越多的学者展开对miRNA的相关研究。迄今为止，已通过克隆和测序技术分析出人[4]、小鼠[5-6]、猪[7]、牛[8]、羊[9]等多个物种的卵巢组织miRNA的表达谱，而且对颗粒细胞[10]、卵母细胞[11]、卵泡液[12]和黄体[13]等特定卵巢组织的miRNA的研究也有重大发现。Otsuka等[14-16]在小鼠卵巢中敲除miRNA生成过程的关键酶Dicerl(dicerl hypomorphic)后，导致雌鼠不育；Medeiros等[17]研究发现，miR-290-295缺陷会引起原始生殖细胞的丢失，从而导致雌性小鼠不育；Yin等[18]研究发现，miR-383通过靶定RNA结合基序单链结合蛋白1(RNA binding motif,single stranded interacting protein 1,RBMS 1)基因能促进小鼠颗粒细胞增殖和激素分泌；Pangas等[19-20]研究发现，miR-224通过调控Smad4基因表达，从而促进小鼠颗粒细胞增殖和芳香酶表达；Yan等[21]研究发现，miR-145通过靶定细胞周期素D2(cyclinB 1,Ccnd 2)基因抑制小鼠颗粒细胞的增殖；Lin等[22]在猪卵巢卵泡中发现，miR-26b通过靶向DNA损伤相关基因的铵转运蛋白(ammonium transporter,AMT)基因，从而调控颗粒细胞凋亡；Ma和Xu 等[13, 23]在猪和牛颗粒细胞中均发现miR-378直接靶向芳香酶，从而调控雌二醇的分泌，这些研究进一步表明，miRNA在动物卵巢卵泡中发挥着不可替代的作用[24-26]。……