肝窦内皮细胞对肝细胞生物学特性影响的体外研究

符思远，罗杏英，门秀丽，张文健，娄晋宁，许诚，李宓

(1.东莞东华医院 肾内科，广东 东莞 523000； 2.中山大学附属第五医院 血液净化中心，广东 珠海 519000； 3.华北理工大学基础学院 病理生理系，河北 唐山 063009；4.中日友好医院 临床医学研究所，北京 100029； 5.苏州瑞徕生物科技有限公司，江苏 苏州 215000； 6.深圳市第三人民医院 肝病医学部，广东 深圳 518000)

肝衰竭在全球致死性疾病中排位第七，行内科保守治疗其病死率也达50%～80%[1]。肝移植是治疗肝衰竭最有效方法[2]，供体短缺、错失移植时机、免疫排斥反应等问题使大部分患者不能得到及时治疗[3]。采用生物型人工肝(bioartificial liver, BAL)是近年发展起来的有效治疗手段，其依靠生物反应器中的肝细胞提供分泌、代谢、生物转化和解毒等功能[4]，更大程度接近人体肝脏。肝细胞在生物反应器内的活性及功能决定了BAL的治疗作用[5]。原代人肝细胞是BAL最理想的细胞材料，但体外增殖困难、体外培养功能迅速丢失等问题限制了其临床应用，而永生化人肝细胞(IHH)通过基因转染技术使肝细胞达到永生化，克服了上述问题[4,6]。肝细胞与非实质细胞共同培养能模拟体内微环境，维持和促进肝细胞的功能，提高代谢物产量[7-8]。本研究通过IHH与永生化人肝窦内皮细胞(IHLSEC)共培养，观察IHH生长情况，评估肝细胞功能的变化，为进一步提高生物人工肝的合成、解毒、生物转化等功能提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 细胞株及主要试剂

1.2 方 法

1.2.3 IHLSEC与IHH共培养的细胞生长情况 (1) 单 独培养组：将4×105孔-1的对数生长期IHH细胞接种于6孔板中，作为对照组；……