青蒿琥酯协同5-氟尿嘧啶杀伤胰腺癌细胞及机制研究

华宏军 叶晓华 陈 媛 陈燕萍

胰腺癌被称为“癌中之王”，是一种恶性程度很高而且在所有恶性肿瘤中预后最差的肿瘤。由于胰腺癌的早期确诊率很低且肿瘤扩散很快，因此胰腺癌的手术成功率很低，五年生存率不足1%[1]。对于胰腺癌患者而言，系统性化疗是不可或缺的治疗方案[2]。5-氟尿嘧啶是一种嘧啶类广谱抗肿瘤药物，能抑制肿瘤细胞中的胸腺嘧啶核苷酸合成酶，从而干扰DNA合成，诱导肿瘤细胞发生凋亡。临床上用于消化道肿瘤、乳腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤的治疗[3-4]。然而5-氟尿嘧啶的长期大剂量使用会造成患者较大的毒副反应。本研究探讨青蒿琥酯对5-氟尿嘧啶抗胰腺癌的协同作用及机制。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 人胰腺癌细胞系Capan-2购于美国模式培养物保存中心(ATCC)，培养在含10%胎牛血清的DMEM培养基中，在37°C恒温培养箱中培养并通入5%CO2。细胞每2～3天传代1次，传代时，用胰酶消化液使细胞进入悬浮状态并用DMEM培养基洗涤2次，将细胞悬液按1:3稀释后传代。

1.2 试 剂 5-氟尿嘧啶（批号559911）、青蒿琥酯（批号 A3731）、噻唑蓝（MTT）（批号 M2128）和凋亡检测试剂盒（批号APOAF）购于德国Sigma-Aldrich。Survivin（批号 2808）、细胞色素 C（批号 4280）、凋亡诱导因子（批号5318）和GAPDH抗体（批号5174）购于美国Cell Signaling。线粒体分离试剂盒（批号C3106）和JC-1（批号C2005）购于碧云天生物科技有限公司。ECL显色试剂盒（批号32106）购于美国Pierce。Lipofectamine2000（批号 11668019）购于美国Invitrogen。

1.3 Survivin基因强制过表达和转染 将Survivin基因的开放阅读框架序列经PCR扩增后以分子克隆的方法与pcDNA3.1连接后构建成Survivin重组质粒。Capan-2细胞接种在6孔板中孵育过夜使之贴壁。……