解毒化浊方诱导HER-2阳性乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡的研究

谷焕鹏 胡升芳

乳腺癌是高度异质性的恶性肿瘤，HER-2阳性乳腺癌，恶性程度高、生存率低、病情进展迅速、易发生转移、预后差[1]。HER-2阳性乳腺癌西医治疗以单克隆抗体曲妥珠单抗为主，其显著降低HER-2阳性乳腺癌死亡率[2]，将疾病无进展生存期延长12.6周[3]，但25%患者出现心脏毒性[4]。“解毒化浊方”是本课题组总结多年临床经验方，用于治疗HER-2阳性乳腺癌，取得较好的疗效，具备一定的理论和临床疗效基础[5-6]。本实验通过“解毒化浊方”中药干预乳腺癌细胞，探讨中药诱导乳腺癌细胞凋亡的作用机制。

1 实验材料

1.1 动物及细胞株 雌性Wistar大鼠，SPF级,体质量200±20g，购自浙江中医药大学动物实验中心，动物合格证号：SCXK（沪）2012-0002。人乳腺癌细胞株SK-BR-3细胞（中国科学院上海细胞研究所编号TCHu225）。

1.2 药物及试剂 “解毒化浊方”由蛇六谷、怀牛膝、半枝莲各30g，黄芪15g，白术 9g，茯苓12g组成。以上中药饮片均由浙江中医药大学附属医院中药房提供（批号151102），按传统煎煮方法制成中药水煎剂，浓缩为3.2g/mL（含生药量）。HER-2抑制剂Mubritinib（TAK-165）（MCE 公司，批号 15426）；DMEM 培养基（美国Gibco公司，批号1801040206）；胎牛血清（美国 Gibco 公司，批号 10099141）；Annexin V/PI（美国BD 公司，批号 6301518）。

1.3 仪 器 流式细胞仪（FC500），美国BECKMAN公司；CO2培养箱（3111），美国 THERMO FISHER；荧光倒置显微镜（IX70-S8F），日本奥林帕斯公司，日本三洋电器有限公司；超净工作台（SW-CJ-1FD），苏州安泰空气技术有限公司。

2 实验方法

2.1 动物分组及剂量设置 将8只雌性Wistar大鼠随机分为对照组、中药组（解毒化浊方组）、西药组（HER-2抑制剂组）、联合组（解毒化浊方+HER-2抑制剂组），每组2只。按“实验动物与人的体表面积比”中人鼠等效药量换算方法计算给药剂量，中药给药剂量18.8g/（kg·d）（均为生药量）。……