不同脱除卵丘细胞方式对牛体外胚胎生产效果的影响

韩永胜，佟桂芝 ，王洪宝，李信涛，宋 斌

（1.黑龙江省畜牧研究所，黑龙江 齐齐哈尔 161005；2.吉林省农业科学院，吉林 长春 130000）

国外采用性控冻精进行体外性控胚胎生产的研究较早，目前囊胚率能达到50%左右［1-2］。我国在该领域研究起步较晚，但国内学者通过不断改善优化牛体外性控胚胎的生产体系，目前体外受精囊胚率已达到25%左右［3-5］。针对牛良种快速扩繁的实际需求及采用性控冻精体外受精生产性控胚胎效率较低、成本较高的现状，该试验系统比较了卵母细胞周围卵丘细胞的脱除方式对性控精液体外受精性控胚胎发育率的影响，旨在为提高体外性控牛胚胎生产效率提供技术基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

试验中所涉及的生化试剂除特别标注外均购自Sigma公司。

1.2 卵母细胞的收集

在牛屠宰场，用无菌剪刀剪取刚屠宰后牛的新鲜卵巢，用含1 000 IU/L青霉素和1 000 IU/L链霉素的灭菌生理盐水冲洗干净，放入含有双抗的32℃生理盐水中，在2 h内送回实验室。用无菌剪刀剪掉周围的脂肪等组织后用预热且加有双抗的生理盐水冲洗牛卵巢3次以上，用10mL带有12﹟针头的一次性注射器抽取卵巢上直径为2～8 mm卵泡的卵泡液，获得的卵泡液置于15 mL离心管内，放在预热至38.5℃的恒温台。分别取直径3.5 cm培养皿4个、直径9 cm培养皿2个，将直径9 cm培养皿底部划上宽度间隔约为0.7 cm的直线。将含有COCs的采卵液（15 mL离心管内）倒入培养皿中，并轻轻摇匀。然后在体视显微镜下收集卵丘—卵母细胞复合体 （cumulus oocyte complex，COCs），并移入盛有抽卵液的直径3.5 cm培养皿中。……