何首乌离体快繁技术体系的建立

曾文丹 严华兵 曹升 谢向誉 陆柳英

摘要：【目的】建立何首烏离体快繁技术体系，为其种苗生产提供技术支持。【方法】以从广西陆川县采集的何首乌幼嫩单芽茎段为外植体，分析不同灭菌时间、不同植物生长调节剂种类和浓度及不同培养方式对其组织培养快繁技术的影响。【结果】适宜何首乌外植体消毒灭菌的方法为0.1% HgCl2浸泡处理8 min;适宜不定芽诱导的初代培养基为MS+1.0 mg/L 6-氨基腺嘌呤（6-BA）+0.05 mg/L a-萘乙酸（NAA），腋芽萌发率达96.7%;适宜的继代增殖培养基为MS+2.0 mg/L苯基噻二唑脲（TDZ）+ 0.05 mg/L NAA，增殖系数为5.68，植株健壮;无菌苗的单芽茎段以浸没间歇式培养（TIBs）增殖系统效果最佳;适宜的生根培养基为1/2MS+0.01 mg/L NAA，生根率达91.33%。【结论】建立了以带腋芽茎段为外植体的何首乌离体快繁技术体系，可为其种苗生产提供新途径。

关键词： 何首乌;离体快繁;苯基噻二唑脲（TDZ）;浸没间歇式培养（TIBs）

中图分类号： S567.9                          文献标志码： A 文章编号：2095-1191（2018）12-2494-06

Establishment of rapid propagation technology for Polygonum multiflorum in vitro

ZENG Wen-dan1，2， YAN Hua-bing1*， CAO Sheng1，2， XIE Xiang-yu1，2， LU Liu-ying1，2

（1Cash Crops Research Institute， Guangxi Academy of Agricultural Sciences， Nanning  530007， China; 2Guangxi Crop Genetic Improvement and Biotechnology Key Lab， Nanning  530007， China）

Abstract：【Objective】The present study was conducted to develop rapid propagation technology of Polygonum multiforum in vitro and provide reference for seeding-use seedling production. 【Method】The single-bud stems of P. multiforum from Luchuan， Guangxi were as the explants. The effects of different sterilization times，types and concentrations of plant growth regulators and different culture methods on the tissue culture rapid propagation technology of P. multiforum were explored. 【Result】The results showed that，the best explant sterilization effects for explants was achieved by immersing the explants in 0.1% HgCl2 solution for 8 min. The suitable primary medium for adventitious bud induction was MS+1.0 mg/L 6-aminadenine（6-BA）+0.05 mg/L a-naphthylacetic acid（NAA），and the axillary bud germination rate was 96.7% under this condition. The suitable subculture medium was MS+2.0 mg/L phenothiadiazolylurea（TDZ）+0.05 mg/L NAA，and the multiplication coefficient was 5.68.  The plantlets were strong. Temporary immersion system（TIBs） culture was suitable for single bud stem segment of P. multiforum aseptic seedlings. The suitable medium for rooting was 1/2MS+0.01 mg/L NAA，and the rooting rate was 91.33%. 【Conclusion】The in vitro rapid propagation system for P. multiforum explants with axillary bud is established，it can provide new method for producing seed-using seedlings.

Key words： Polygonum multiforum; in vitro propagation; phenothiadiazolylurea（TDZ）; temporary immersion system（TIBs）

0 引言

【研究意义】何首乌（Polygonum multiforum）别名首乌，为蓼科多年生宿根藤本植物，属传统中药材，富含多种化学成分、维生素和微量元素及人体必须的18种氨基酸等，具有较高的药用价值和经济价值（Rachel et al.，2003;Yang et al.，2005;孙桂波等，2007;曾文丹等，2016）。由于市场对何首乌原材料需求量不断增大，其野生种源很难满足市场需求，加上长期过量的采摘势必会造成野生何首乌资源枯竭。但何首乌常规繁殖系数低，用种量大，难以满足规模化生产对种源的要求。组织培养技术具有繁殖系数高、不受外界环境条件限制等特点，可在短时间内获得大量的材料，实现规模化生产。因此，建立以带腋芽茎段为外植体的何首乌离体快繁技术体系，对扩大其种苗生产途径及促进新品种推广具有重要意义。【前人研究进展】李娟玲等（2003）研究发现，以何首乌种子为外植体，以MS为基本培养基，添加0.5 mg/L吲哚丁酸（IBA）和3.0%蔗糖，较适宜何首乌离体诱导培养。龙滢等（2005）研究发现，何首乌茎尖的诱导分化能力比茎段强，诱导率达100.0%。袁红霞等（2005）以何首乌块根为外植体，利用正交试验设计筛选出MS+0.5 mg/L 2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸）+3.0 mg/L吲哚乙酸（IAA）+0.1 mg/L 6-氨基腺嘌呤（6-BA）+3.0%蔗糖为最佳愈伤组织诱导培养基。陈菊和陈国惠（2006b）采用二次回归正交设计方法研究了何首乌继代增殖培养基中6-BA和NAA（a-萘乙酸）的浓度配比关系。姚焱等（2010）研究发现，2，4-D是诱导何首乌叶片愈伤组织的必需激素。间歇式浸没培养（TIBs）系统是新型的植物组织培养系统，杨柳等（2010）使用TIBs系统进行果蔗组织培养，结果发现，增殖系数较传统方法高10.0倍以上;Yan等（2010）研究发现，利用TIBs系统培养的淮山组培苗各项生长指标均显著高于传统方法诱导的组培苗;高美萍等（2016）利用TIBs系统开展慈姑组培快繁，发现TIBs系统可使慈姑组培苗一代增殖19.5倍以上，比传统方法提高3.0倍以上。【本研究切入点】目前，利用何首乌带腋芽茎段为外植体建立离体快繁技术体系的研究鲜见报道。【拟解决的关键问题】建立以带腋芽茎段为外植体的何首乌离体组培快繁技术体系，为加快何首乌良种繁育及开展其生物技术育种打下基础。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

何首乌幼嫩茎段采自广西陆川县中药材种植示范基地。HgCl2、6-BA和NAA等均购自生工生物工程（上海）股份限公司。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 外植体预处理 将采集的何首乌嫩茎剪成长约2.0 cm的单芽茎段，剪掉其叶片后置于添加洗洁精的水中用软毛刷清洗表面污垢，在流水中冲洗干净后备用。

1. 2. 2 外植体表面消毒 将预处理后的何首乌单芽茎段分别用0.1% HgCl2浸泡4、6、8和10 min进行消毒（4个消毒处理）。浸泡期间常振荡容器，使外植体与HgCl2溶液充分接触。将经消毒处理的外植体用无菌水冲洗4～5次，用无菌滤纸吸干表面水分备用。接种时，在超净工作台上将单芽茎段修剪至长约1.0 cm后插入MS培养基。每处理接种45瓶，每瓶接种1个外植体，重复3次，每5 d观察记录1次，接种30 d后统计污染率、褐化率及存活率。

1. 2. 3 初代培养基筛选 将经消毒处理的无菌单芽茎段分别接种于添加1.0、2.0和3.0 mg/L 6-BA 和0.01、0.02和0.05 mg/L NAA组合的MS培养基中（共6个处理）。每处理接种15瓶，每瓶接6个单芽茎段，重复3次，每重复5瓶。培养30 d后统计腋芽萌发率、株高、愈伤组织宽度和不定芽数，观察不定芽的生长情况。

1. 2. 4 继代培养基筛选 将初代培养获得的无菌苗单芽茎段接种于添加1.5、2.0和2.5 mg/L 6-BA或1.5、2.0和2.5 mg/L苯基噻二唑脲（TDZ）、0.02和0.05 mg/L NAA的MS培养基中。每处理接种15瓶，每瓶接6个单芽茎段，重复3次，每重复5瓶。培养30 d后统计不定芽的增殖系数（带叶茎节位数）、株高及愈伤组织宽度、鲜重和干重。

1. 2. 5 不同培养方式对继代增殖的影响 将无菌苗的单芽茎段分别采用半固体培养、液体培养和TIBs系统进行增殖培养。基本培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，比较不同培养方式无菌苗的繁殖系数、株高、鲜重和干重差异。每处理接种15瓶，每瓶接6个单芽茎段，重复3次，每重复5瓶。每隔15 d观察记录1次，接种30 d后统计不定芽的增殖系数、株高及愈伤组织宽度、鲜重和干重。

1. 2. 6 生根培养 将无菌苗的单芽茎段接种于添加0、0.10、0.20和0.30 mg/L NAA的1/2MS培养基中。每处理接种15瓶，每瓶接6个单芽茎段，重复3次，每个重复5瓶。接种30 d后统计不定芽的生根率和株高，并观察生长情况。

1. 2. 7 炼苗和移栽 将生长健壮、根系较发达的无菌组培苗从培养室移入温室炼苗，放置约5 d后拧松瓶盖，使瓶内环境与外界相当，让组培苗在自然状态下驯化2～3 d后取出，洗净附着的培养基，用0.1%高锰酸钾溶液清洗后栽入珍珠岩∶草炭土∶黄土（体积比2∶2∶1）的混合基質中。移栽30 d后统计其成活率。

1.2.3～1.2.6中，培养温度（25±1）℃，光照1500～2000 lx，光照时间12 h/d。若无特别说明，培养基均添加30.0 g/L蔗糖和6.0 g/L琼脂粉，pH 5.8。

1. 3 统计分析

试验数据采用SPSS 18.0和Excel 2010进行整理、统计和分析。

2 结果与分析

2. 1 外植体的消毒结果

由表1可知，随消毒时间的延长，何首乌外植体的污染率明显降低，但褐化率逐渐升高。其中，消毒时间为4 min时外植体的褐化率仅4.7%，但污染率达53.2%，成活率仅42.1%;消毒10 min时外植体的污染率最低，仅10.3%，但褐化率最高，达25.6%;消毒时间为8 min时外植体的褐化率为10.4%，污染率为12.5%，成活率最高，达77.1%。说明0.1% HgCl2消毒8 min对何首乌外植体的灭菌效果最佳。

2. 2 初代培养基的筛选结果

经消毒处理的何首乌单芽茎段接种至附加不同浓度6-BA和NAA组合的MS培养基中，培养14 d后腋芽开始萌发，部分茎段基部开始膨大形成愈伤组织。由表2可知，在相同NAA浓度下，处理3的腋芽萌发率、株高和产生的不定芽数显著低于处理1和处理2（P<0.05，下同），愈伤组织宽度较大，但与处理2差异不显著（P>0.05，下同）;处理6的腋芽萌发率、株高和不定芽数显著低于处理4和处理5，愈伤组织宽度显著大于处理4和处理5，说明高浓度（3.0 mg/L）6-BA不利于何首乌腋芽萌发和萌发芽的生长。在相同低浓度（1.0和2.0 mg/L）6-BA下，随NAA浓度的增加，何首乌茎段腋芽萌发率和株高均增加。在添加1.0 mg/L 6-BA和0.05 mg/L NAA组合的MS培养基中，何首乌外植体的腋芽萌芽率、株高和不定芽数均最高，芽的长势良好，植株健壮，表明MS+1.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA是最佳的何首乌外植体初代培养基。

2. 3 继代培养基的筛选结果

将初代培养诱导获得的单芽茎段接种至不同浓度6-BA、TDZ和NAA组合的培养基进行继代增殖培养，结果见表3。由表3可知，在相同NAA浓度下，随6-BA浓度的增加，不定芽的增殖系数、株高、鲜重和愈伤组织鲜重均呈先增加后减少的变化趋势，其中以2.0 mg/L 6-BA处理的增殖效果最佳;在相同6-BA浓度下，添加0.05 mg/L NAA较添加0.02 mg/L NAA增殖效果佳，其中以处理4的增殖效果最佳;在相同NAA浓度下，随TDZ浓度的增加，不定芽的增殖系数、鲜重和愈伤组织鲜重均呈先增加后减少的变化趋势;株高和愈伤组织宽度随之增加，但差异不显著。此外，以相同浓度的TDZ和6-BA对何首乌组培苗进行增殖培养，TDZ诱导的不定芽较6-BA诱导的不定芽粗壮（图1-A和图1-B），且处理8的增殖系数显著高于处理4。说明MS+2.0 mg/L TDZ+0.05 mg/L NAA为何首乌组培苗最佳继代培养基。

2. 4 不同培养方式对不定芽继代增殖的影响

由表4可知，采用TIBs系统培养何首乌组培苗（图1-C）的增殖系数、株高和不定芽鲜重均高于其余2种培养方式，其中增殖系数达5.24，显著高于以液体培养方式诱导的不定芽，且愈伤组织宽度仅3.27 mm，显著低于其余培养方式。说明TIBs系统不利于何首乌组培苗基部愈伤组织产生，可作为何首乌不定芽增殖的最佳培养方式。

2. 5 生根培养基的筛选结果

不同NAA浓度对何首乌组培苗生根的影响结果见表5。当培养基中不添加NAA时，组培苗生根率仅39.00%，株高为2.14 cm，显著低于其余3个处理，且根系纤细，须根少，不利于组培苗移栽成活。随NAA浓度的增加，组培苗根系增粗，形成须根。但当NAA浓度增至0.30 mg/L时，组培苗根部形成愈伤组织，部分植株生长异常（图1-F）。当NAA浓度为0.10 mg/L时，组培苗生根率为91.33%，显著高于其余处理，且植株生长正常，根系较粗（图1-D和图1-E）。说明1/2MS+0.10 mg/L NAA为何首乌最佳生根培养基。

2. 6 组培苗移栽

将生根苗移栽于珍珠岩∶草炭土∶黄土（2∶2∶1）混合基质中，30 d后组培苗移栽成活率达95.0%，且生长良好（图1-G）。

3 讨论

TDZ是人工合成的苯基脲衍生物之一，具有很强的类似于细胞分裂素的活性，已广泛应用于各种植物的不定芽、愈伤组织及体细胞胚诱导，且作用效果明显（魏岳荣等，2007;贾梦雪等，2013;朱桥等，2014;李晶等，2016）。吴光洪等（2016）研究认为，在诱导蓝莓叶片产生不定芽过程中，TDZ发挥了至关重要的作用。刘义存等（2017）研究发现，TDZ对栎叶枇杷茎段愈伤组织具有很强的诱导能力。孙英坤等（2017）分别采用6-BA、激动素（KT）和玉米素（ZT）进行堇叶紫金牛不定芽诱导，均无法诱导产生不定芽，改用TDZ后，各处理均产生大量不定芽。本研究结果与上述研究结果相似，将诱导出的何首乌单芽茎段移至MS+2.0 mg/L TDZ+0.05 mg/L NAA 增殖培养基培养，殖系数最大，达5.68，比使用添加同浓度6-BA的培养基（MS+2.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA）的增殖系数大14.8%，且植株粗壮。

TIBs系统培养可促进容器中气体与培养基进行气体交换，防止营养成分沉积和有害物质积累（许亚良和张家明，2013;曾文丹等，2014）。本研究采用TIBs方式培养何首乌组培苗单芽茎段，其增殖系数、株高和不定芽鲜重均高于半固体培养和液体培养方式，与杨柳等（2010）对果蔗、Yan等（2010）对淮山、高美萍等（2016）对慈姑的研究结果相似。

已有研究表明，影响何首乌生根的因子排序为培养基>IBA>蔗糖>NAA，而添加一定濃度（0.50 mg/L）植物生长调节剂[多效唑（PPP333）]对其不定根诱导具有促进作用（陈菊和陈国惠，2006a;徐秋云等，2012），本研究结果与其存在差异，在1/2MS中添加低浓度（0.10 mg/L）NAA可促进何首乌组培苗生根（生根率高于90.0%），而添加高浓度（0.30 mg/L）NAA会促使组培苗基部形成愈伤组织，不利于生根，可能与供试外植体来源不同有关。

4 結论

本研究建立的何首乌离体组培快繁技术体系为：将幼嫩何首乌单芽茎段用0.1% HgCl2消毒8 min，无菌水清洗4～5次灭菌后，在初代培养基MS+1.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA中进行不定芽诱导，在MS+2.0 mg/L TDZ+0.05 mg/L NAA中进行组培苗增殖培养，在1/2MS+0.10 mg/L NAA中进行生根培养。该离体快繁技术体系可为何首乌种苗生产提供新的途径。

参考文献：

陈菊，陈国惠. 2006a. 何首乌生根培养因子的优选研究[J]. 西南农业大学学报（自然科学版），28（5）：756-758. [Chen J，Chen G H. 2006a. Optimization of the culture conditions for the rooting of Polygonum multiforum plantlets[J]. Journal of Southwest Agricultural University（Natural Science），28（5）：756-758.]

陈菊，陈国惠. 2006b. 6-BA与NAA浓度配比对何首乌不定芽增殖的影响[J]. 中国农学通报，22（11）：173-175. [Chen J，Chen G H. 2006b. Study of the concentration of 6-BA and NAA in the rapid propagation of Polygonum multiflorum Thunb[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin，22（11）：173-175.]

高美萍，林志城，张驰，江文，董伟清，欧昆鹏，桂杰，闭志强，何芳练，陈丽娟. 2016. 荸荠组培苗在间歇浸没式生物反应器（TIBs）中的高效增殖技术[J]. 南方农业学报，47（10）：1653-1657. [Gao M P，Lin Z C，Zhang C，Jiang W，Dong W Q，Ou K P，Gui J，Bi Z Q，He F L，Chen L J. 2016. Efficient propagation of Eleocharis dulcis plantlets in temporary immersion bioreactors（TIBs）[J]. Journal of Southern Agriculture，47（10）：1653-1657.]

贾梦雪，徐瑾，叶香娟，刘芊，王喆，刘燕. 2013. 春石斛优良品种‘森禾2006组培快繁体系的建立[J]. 植物生理学报，49（12）：1363-1367. [Jia M X，Xu J，Ye X J，Liu Q，Wang Z，Liu Y. 2013. Establishment of rapid propagation system for elite variety of Dendrobium nobile Lindl. ‘Senhe 2006 by tissue culture[J]. Plant Physiology Journal，49（12）：1363-1367.]

李晶，罗玉洁，张青林，罗正荣，刘继红. 2016. 君迁子休眠芽及叶片离体培养体系优化及植株再生[J]. 华中农业大学学报，35（4）：14-19. [Li J，Luo Y J，Zhang Q L，Luo Z R，Liu J H. 2016. In vitro culture system optimization and regeneration of date plum（Diospyros lotus Linn.） dormant buds and leaves[J]. Journal of Huazhong Agricultural University，35（4）：14-19.]

李娟玲，刘国民，邱文华，徐立新. 2003. 何首乌茎段离体培养的研究[J]. 贵州科学，21（3）：86-91. [Li J L，Liu G M，Qiu W H，Xu L X. 2003. Study on the stem segments culture in vitro of Polygonum multiflorum Thunb[J]. Guizhou Science，21（3）：86-91.]

刘义存，黄天启，林顺权. 2017. 枇杷属植物野生种的茎段愈伤组织诱导植株再生研究[J]. 果树学报，34（6）：762-768. [Liu Y C，Huang T Q，Lin S Q. 2017. Study on plant regeneration of callus from the stem of wild loquat[J]. Journal of Fruit Science，34（6）：762-768.]

龙滢，杨鑫，余春香. 2005. 何首乌的组织培养研究[J]. 中医药导报，11（11）：63-64. [Long Y，Yang X，Yu C X. 2005. Tissue culture research on fleece flower root[J]. Guiding Journal of TCM，11（11）：63-64.]

孙桂波，纪凤兰，徐惠波，孙晓波. 2007. 何首乌的化学成分与药理作用研究进展[J]. 长春中医药大学学报，23（4）：105. [Sun G B，Ji F L，Xu H B，Sun X B. 2007. Advan-ces in studies on the chemical components and pharmacological activities of Radix polygoni multiflora[J]. Journal of Changchun University of Traditional Chinese Medicine，23（4）：105.]

孙英坤，胡绍庆，庞基良，高凯，刘华红，陈焕伟，姚涛，陈林敬，沈柏春. 2017. 珍稀濒危物种堇叶紫金牛高效快繁体系的建立[J]. 植物学报，52（6）：764-773. [Sun Y K，Hu S Q，Pang J L，Gao K，Liu H H，Chen H W，Yao T，Chen L J，Shen B C. 2017. Establishment of a tissue culture and propagation system for Ardisia violacea，a rare and endangered species[J]. Chinese Bulletin of Botany，52（6）：764-773.]

魏岳荣，杨护，黄秉智，黄霞，黄学林，邱继水，许林兵. 2007. Picloram、ABA和TDZ对香蕉体细胞胚胎发生的影响[J]. 园艺学报，34（1）：81-86. [Wei Y R，Yang H，Huang B Z，Huang X，Huang X L，Qiu J S，Xu L B. 2007. Effects of Picloram，ABA and TDZ on somatic embryogenesis of banana[J]. Acta Horticulturae Sinica，34（1）：81-86.]

吴光洪，孙英坤，陈林敬，沈柏春，邓梦楚，钱飞. 2016. 兔眼蓝莓‘粉蓝叶片直接诱导丛生芽再生技术体系的建立[J]. 植物生理学报，52（3）：372-380. [Wu G H，Sun Y C，Chen L J，Shen B C，Deng M C，Qian F. 2016. The technology system establishment for direct induction of Vaccinium ashei ‘Powderblue leaves to regenerate multiple shoots[J]. Plant Physiology Journal，52（3）：372-380.]

徐秋云，王华磊，赵致，刘洪昌，李金玲，罗春丽，罗夫来，黄明进，熊显榕. 2012. 何首乌组培快繁培养基的优化[J]. 贵州农业科学，40（10）：7-10. [Xu Q Y，Wang H L，Zhao Z，Liu H C，Li J L，Luo C L，Luo F L，Huang M J，Xiong X R. 2012. Optimization on medium for tissue culture and rapid propagation of Polygonum multiforum[J]. Guizhou Agricultural Scicences，40（10）：7-10.]

许亚良，张家明. 2013. 一种高效大规模组培方法——间歇浸没培养法[J]. 植物生理学报， 49（4）：392-399. [Xu Y L，Zhang J M. 2013. An efficient method for mass tissue culture—Temporary immersion culture principle[J]. Plant Physiology Journal，49（4）：392-399.]

杨柳，秦钢，杨丽涛，罗瑞鸿，游建华，Ariel D Arencibia，魏源文，李杨瑞. 2010. 利用间歇浸没式生物反应器进行果蔗组培快繁[J]. 热带作物学报，31（4）：614-620. [Yang L，Qin G，Yang L T，Luo R H，You J H，Arencibia A D，Wei Y W，Li Y R. 2010. Optimization of saccharum sinensis roxb rapid multiplication in temporary immersion biorea-ctors system[J]. Chinese Journal of Tropical Crops，31（4）：614-620.]

姚焱，汪珍春，王小兰，张平，田长恩. 2010. 广东道地中药何首乌的组织培养[J]. 北方园艺，（7）：175-177. [Yao Y，Wang Z C，Wang X L，Zhang P，Tian C E. 2010. Tissue culture of Polygonum multiflorum Thunb origined from Guangdong Deqing[J]. Northern Horticulture，（7）：175-177.]

袁红霞，王金虎，陈德燕. 2005. 何首烏块根愈伤组织培养[J]. 苏州大学学报，21（3）：86-88. [Yuan H X，Wang J H，Chen D Y. 2005. Callus culture of Polygonum multiforum root tuber[J]. Journal of Suzhou University，21（3）：86-88.]

曾文丹，陆柳英，谢向誉，严华兵. 2014. 优良木薯品种新选048离体快繁技术[J]. 南方农业学报，45（6）：950-954. [Zeng W D，Lu L Y，Xie X Y，Yan H B. 2014. Rapid propagation in vitro technology for fine cassava variety Xinxuan 048[J]. Journal of Southern Agriculture，45（6）：950-954.]

曾文丹，陆柳英，谢向誉，严华兵. 2016. 何首乌繁殖技术研究进展[J]. 中国热带农业，（3）：66-68. [Zeng W D，Lu L Y，Xie X Y，Yan H B. 2016. Research progress of reproduction of Polygonum multiforum[J]. China Tropical Agriculture，（3）：66-68.]

朱桥，丁俊伟，杨学文，梁廉，邵玲. 2014. 血叶兰的组织培养与快速繁殖[J]. 植物生理学报， 50（6）：805-809. [Zhu Q，Ding J W，Yang X W，Liang L，Shao L. 2014. Tissue culture and rapid propagation of Ludisia discolor[J]. Plant Physiology Journal，50（6）：805-809.]

Rachel W L，David G L，Stephen P M，Leach D N. 2003. Anti-inflammatory activity of Chinese medicinal vine plants[J]. Journal of Ethnopharmacol，85（1）：61.

Yan H B，Liang C X，Li Y R. 2010. Improved growth and quality of Siraitia grosvenorii plantlets using a temporary immersion system[J]. Plant Cell，Tissue and Organ Culture，103（1）：131-135.

Yang P Y，Almofti M R，Lu L，Kang H，Zhang J，Li T J，Rui Y C，Sun L N，Chen W S. 2005. Reduction of atherosclerosis in cholesterol fed rabbits and decrease of expre-ssion of intracellular adhesion molecule and vascular endothelial growth factor in foam celles by a water-soluble fraction of Polygonum multiflorum Thunb[J]. Journal of Pharmacal Science，99（3）：294.