莱芙特敏真菌荧光染液对216例浅部皮肤真菌病的检出报告

桑忠强 沈帅帅 张馨 涂玉花 潘宏超 张云

【摘要】目的：通过新型的荧光染液对浅部皮肤真菌病的致病菌进行镜检，观察这一新型染液对真菌的检出率；方法：先后用真菌荧光染液A和B将所刮取的鳞屑、甲屑及毛囊内容物充分溶解后，将玻片放置在OlympusCX23荧光显微镜上的载玻台上镜检，寻找菌丝和抱子；结果：应用这一新型染液对常见皮肤浅部真菌的检出率达到77.8%，相对于传统的氢氧化钾（KOH）溶液镜检法检出率高，检出时间短，辫识度高；结论：莱芙敏特真菌荧光染液对浅部致病真菌的检出率高，快速简单容易操作，可以为临床医生对浅部真菌感染的诊断和治疗提供一个快捷准确的方法。

【关键词】莱芙敏特真菌荧光染液；浅部皮肤真菌病；检出报告

浅部真菌病是一种主要寄生在人体皮肤表层的常见真菌引起的一种感染，其致病菌包括皮肤癣菌、念珠菌、霉菌以及马拉色菌等，临床上常见的浅部真菌病有花斑癣，糠秕孢子菌毛囊炎，股癣，手癣，脚癣以及甲癣等[1，2]，传统的真菌镜检法为KOH镜检法，这种方法有一定的优势，但存在检出率低的问题[3，4]，并且检测花费时间较长，而真菌培养虽然可以准确鉴定，但是操作起来较为复杂，且出报告的所需时间较长，给临床医生的诊治带来一定的困扰。我科室从2017年5月至7月期间对门诊就诊的浅部真菌病患者的皮屑做真菌荧光染色镜检，并对镜检情况进行汇总，现将结果汇报如下：

1 资料和方法

1.1 资料

1.1.1 病人资料

统计我科2017年5月至2017年7月间的门诊就诊时初步诊断为浅部真菌感染的患者分别进行真菌荧光染液镜检，诊断标准参考《中国临床皮肤病学[5]》，这期间镜检的病人数为216人次，男133例，女83例，其中临床诊断为股癣的有59例，花斑癣的有34例，糠秕孢子菌毛囊炎有12例，手癣30例，脚癣42例，甲癣39例，镜检阴性患者为60例，其中12例为手癣，22例为脚癣，26例为甲癣，年龄2-75岁，平均37.3±1.2岁，病程5d-28年，平均4.2年。入选病例均确定真菌荧光检测前1月内未口服或外用过抗真菌药。

1.1.2 试剂材料及仪器

莱芙敏特真菌染液试剂盒（A液和B液200T），OlympusCX23荧光显微镜Toupeam Industrial Digtal摄像头，Toupview软件，载玻片，玻片，刮刀，红外接种灭菌器。

1.2 方法

1.2.1 染色步骤

（1）应用灭菌过的刮刀刮取新近被侵染的组织，如癣病的边缘性损害、新鲜的水庖、头癣的断发、甲真菌病的甲板深层、马拉色菌毛囊炎的毛囊内容物等，并用刮刀均匀涂抹在载玻片上；（2）将载玻片放置在水平位置上，直接向皮屑样本中央滴一滴染色A液，染色液以覆盖或淹没整个样品为准，使其中成分与多聚物进行充分的结合反应，持续染色2min；（3）2min后，直接向样本滴上一滴染色B液，染色液以覆盖或淹没整个样品为準，持续染色2min；（4）盖上盖玻片，吸去多余染液，置于荧光显微镜下进行观察；

1.2.2 镜检

先用低倍镜下对焦（×10），打开荧光按钮，先在低倍显微镜下查看目标视野，微调细准焦螺旋，目标视野对焦清晰后，换成高倍镜（×40），微调细准焦螺旋，观察是否有菌丝及孢子，找到最清晰的视野后，打开Toupview软件，调节破片位置及细准焦螺旋直至软件视频区出现一个最清晰的图像，点击捕获，然后保存

2 结果

（1）对2017年5月至2017年7月期间的病人的初步诊断以及镜检结果进行列表统计，其中花斑癣34例、糠秕孢子菌毛囊炎12例，股癣59例，手癣30例，脚癣42例，甲癣39例，检出率分别位100%、100%、100%、60%、47.6%、33.3%，总的检出率为72.2%.如表1所示。

（2）镜检图片。分别选取各种皮肤浅部真菌病的一张较为典型的真菌荧光镜检图片，如图1至图4所示。

3 讨论

莱芙敏特真菌荧光染液是一款新型的快速检测真菌病原体的产品，可以用于检测皮屑、甲屑以及毛囊内容物组织中可能存在的各类真菌。该试剂盒中配有染色A液和染色B液，A液是一种含有高纯度荧光素的复合溶液，染液B是一种含特定比例背景光压制溶液。荧光素将与组织中可能存在的细胞壁β-多糖结合，如几丁质和纤维素等，从而标记荧光，在特定检验波长下进行检测。相对于传统的真菌镜检方法，这种新型荧光染液的检测方法检出率较KOH检测法检出率较高，操作起来方便、高效、快速，可以去除因为杂质的干扰，相当于在真菌的细胞壁上加上了一个探针标记，只要所刮取的皮屑、甲屑以及毛囊内容物中存在真菌，都能被荧光标记，从而在特定检测波长下被显示，大大缩小了镜下寻找真菌的视野范围，并能大大缩短寻找时间，排除了其他因杂质、光线折射所造成的干扰，大大提高了检出率。但同时，该真菌荧光染液对手癣、脚癣及甲癣的检出率较低，分析其原因可能和取材部位有较大关系，因为掌跖部皮屑以及甲屑的角质层较厚，荧光染液要对里面的真菌进行标记就必须充分溶解角质层[6]，分析有可能染液和皮屑的结合时间应该适当延长，再者，有可能所取的皮屑里面有可能没有真菌，比如像甲癣患者其致病菌如皮肤癣菌、酵母菌和霉菌侵犯部位较深，往往可能在甲板下，甲床上，所以当取甲癣患者的趾甲屑时，有可能没有刮取到到含有真菌的甲屑，所以造成了甲癣的检出率较低[7]，而该染液在本次实验研究中对花斑癣、马拉色菌毛囊炎和股癣的检出率都达到了100%。

莱芙敏特真菌荧光染液检测试剂盒给皮肤科医生提供了一个很好的真菌检测方法，对浅部真菌感染的诊治提供了一个迅捷高效的通道，但同时临床医生在对手癣、脚癣以及甲癣患者进行荧光染液检测时，还是要结合患者的临床表现以及皮损特征确定最终的治疗方案。

参考文献

[1]戴辉，许爱娥，孙学成等.共聚焦激光扫描显微镜在皮肤浅部真菌感染诊断中应用价值的评估[J].中华皮肤科杂志，2012，45（08）：584-586.

[2]刘丽，赖维，龚子鉴等.浅部真菌感染临床诊断与真菌镜检及培养结果的差异性比较[J].临床皮肤科杂志，2009，38（01）：12-14.

[3]刘寿全，徐媛媛，阎岩等.甲真菌病甲板真菌镜检方法的探讨[11.中国皮肤性病学杂志，2009，23（05）：316-316.

[4]袁中行，仇红霞，刘庆勇等.改良复方KOH在真菌镜检中应用效果分析[J].中国皮肤性病学杂志，2011，25（12）：993-994.

[5]赵辫.中国临床皮肤病学[M].南京：江苏科学技术出版社，2010：555-569

[6]阳眉，兰长贵，梅晓锋等.3种真菌直接镜检溶液诊断甲真菌病的比较研究[J].检验医学与临床，2013，10（03）：275-276.

[7]余进，李若瑜.医学真菌实验室常规检查方法[J].中华检验医学杂志，2009，32（01）：114-116.