正交试验法优选肝加欣片提取工艺

周立峰 尤春娟 黄帅波

（吉林省正和药业集团股份有限公司，吉林通化134001）

0 引言

肝加欣片由五味子、柴胡、棉茵陈、板蓝根、云芝胞内糖肽、猪胆粉组成，具有舒肝解郁、清热利湿的作用，用于治疗慢性病毒性肝炎肝郁脾虚证，症见胸胁胀痛、神疲乏力、食欲不振、烦躁等。该品种为半浸膏片，即由五味子、柴胡、棉茵陈、板蓝根的浸膏与云芝胞内糖肽、猪胆粉细粉制粒压片而成。本文采用正交试验法，对肝加欣片中五味子的乙醇提取工艺[1]进行优选，为该制剂的生产工艺提供依据。

1 试验材料

1.1 试验设备

实验室用索氏提取器（上海舍岩仪器有限公司）、实验室用旋转蒸发仪（天津星科科技有限公司）、XZB-01型循环水式多用真空泵（辽宁方泰仪器有限公司）、SY-Z型数显水浴锅（上海晰达仪器有限公司）、电加热套（上海晰达仪器有限公司）、多功能微型提取浓缩机组（武汉制药设备制造有限公司）、YQB系列超音速气流粉碎机（山东某气流粉碎机厂）、LY-2型实验室用槽型混合机（常州某制药机械有限公司）、YB-30型实验室用摇摆式颗粒机（常州某制药机械有限公司）、实验室用热风循环烘箱（苏州某制造有限公司）、XYP-1小型旋转式压片机（上海某制药机械厂）、XXB-A实验型高效包衣机（上海某制药机械厂）、MB25型快速水分测定仪（上海洪纪仪器设备有限公司）、CS241电子计数台秤（上海宏衡实业有限公司）、GF-300AX万能粉碎机（江阴某机械制造有限公司）、多功能提取罐（武汉某制药机械厂）、球形罐（武汉某制药机械厂）、WZ75型外循环式真空蒸发器（武汉某制药机械厂）、乙醇回收器（武汉某制药机械厂）、GZHX-22管式真空干燥箱（武汉某制药机械厂）、JZJ2BE型水环式罗茨真空泵机组（上海万经泵业制造有限公司）、CHW-6型槽型混合机（北京某研究所）、YB-99型摇摆式颗粒机（北京某研究所）、GFG120型高效沸腾干燥机（上海某制药设备厂）、HD-600型多向运动混合机（温州某制药机械设备厂）、ZPY-136型旋转式压片机（上海某制药设备厂）、BGB-150B型高效包衣机（温州某制药机械设备厂）、DPP-250B型铝塑包装机（瑞安某包装机械厂）、RE5210A（10 L）旋转蒸发仪（上海贤德实验仪器有限公司）、HH-A型数显水浴锅、电加热套（上海况胜实业发展有限公司）、HTYWS-H型快速水分测定仪（武汉市华天电力自动化有限责任公司）、RS232接口电子台秤（江苏麦莎实业有限公司）、1/1 000电子天平（深圳市中杰衡器有限公司）、岛津LC2010AC型高效液相色谱仪（上海纳诺实业有限公司）、玻璃烧杯（上海达丰玻璃仪器厂）、药典筛（山东青州市迈德森制药机械厂）。

1.2 原辅料

原料：五味子、柴胡、棉茵陈、板蓝根、云芝多糖、猪胆粉等药材（安徽省亳州市药材总公司中药材公司）。

辅料：淀粉（苏州德巴化工有限公司），药用乙醇（南京化学试剂股份有限公司），白色包衣粉、灰蓝色包衣粉（湖南岳阳嘉之源生物科技有限公司）。

2 方法与结果

2.1 因素水平的确定

本试验选择提取次数（A）、提取时间（B）、乙醇浓度（C）、乙醇用量（D）4个影响因素，根据以往生产的提取工艺经验，本试验将提取次数（A）作为固定因素，选择提取时间（B）、乙醇浓度（C）、乙醇用量（D）3个因素作为变量进行考察。

本试验采用L9（34）正交试验法，每次试验水平为N，即试验号，其因素水平设计如表1所示。

2.2 试验方法与结果

按照L9（34）正交试验表安排试验，以粉碎后的浸膏混合粉中五味子醇甲的百分比含量为考察指标，试验安排及结果如表2所示，方差分析结果如表3所示。

从方差分析结果可知：方差分析各因素两水平间均无显著性差异，影响最大的因素为D乙醇用量，3个因素影响主次顺序为D＞B＞C。综合考虑最佳提取工艺为AB2C2D2，即提取3次、提取180 m in、乙醇浓度75%、乙醇用量3倍量。

2.3 验证试验

2.3.1 制剂验证过程

按以上最佳提取工艺，制备3批（批量300 000片）肝加欣片，称取五味子95.25 kg，经万能粉碎机粗碎成0.2～0.5mm颗粒，装袋投入醇提罐中，提取3次。第1次：（先浸泡2 h）提取180 m in，75%乙醇3倍量；第2次：提取60 m in，75%乙醇3倍量；第3次：提取60 min，75%乙醇3倍量，提取液备用。按批配方量称取柴胡、板蓝根、棉茵陈投入提取罐中，加水量为药材量的5倍，常压回流提取1 h；真空回流提取4 h进行真空浓缩，温度为60～90℃，真空度为-0.05～-0.09MPa，浓缩到相对密度达1.10～1.14（60℃）备用；将醇提药液和水提药液加入到刮板式浓缩器内合并浓缩至相对密度达1.3（60℃）；将五味子提取液与板蓝根等药液合并，用球形罐进行浓缩成稠膏（真空度0.04～0.06 MPa，温度75～80℃）；稠膏相对密度为1.3（60℃），再加入30 kg的淀粉混合后，减压真空干燥（干燥温度为60～70℃，真空度为0.075～0.095MPa），干燥8 h后，放凉，称重，用万能粉碎机粉碎，过80目筛，放入桶内的塑料袋中；用600型多向运动混合机混合30 m in，放入桶内的塑料袋中，以30万片为一批，分两次制粒。

表1 肝加欣片正交试验的因素水平

表2 肝加欣片正交试验安排及结果

表3 方差分析

称取每批量肝加欣膏粉的1/2，加入3 kg的云芝胞内糖肽和3 kg的猪胆粉，投入湿法混合颗粒机中，干混30 s后缓缓加入60%乙醇3 000m L，快切慢混60 s，投入沸腾干燥机内，60～65℃下干燥10m in，下料后用12目旋振筛整粒；两批的颗粒称重后投入多向运动混合机中，加总重1.0%的硬脂酸镁，混合20m in，下料于不锈钢桶中；在旋转式压片机10.5mm的浅凹冲膜中进行压片，转速为30 r/min，压力适度。每15m in称量一次片重，用1%的电子天平称量，分别称量10片，记录，片重差异控制在0.35 g（±2%）。片子外观：硬度适宜，无麻面，无破边，无裂片，表面光洁。称取白色包衣粉（为基片重的2.5%）放进不锈钢桶中，加纯化水，浓度为12%，如白色包衣粉2.5 kg，加纯化水量为2.5 kg÷（12/100）-2.5 kg（包衣剂用量）=18.3 kg，搅拌45m in，即可喷用。喷浆开始转速可为4 r/min，当包上一层后即可改为5～6 r/m in，再增加到8～9 r/m in，喷浆量以不粘片为准，温度不可超过45℃。白色浆料用完后包灰蓝色浆料（在白色浆料未包完之前即配灰蓝色浆料，方法用量同白色），片面要求平滑，颜色均匀，无色差，无污点，美观。对颗粒含量（按每片五味子乙素计）、每片素片五味子醇甲含量及每片薄膜衣五味子醇甲含量进行检测，证明提取工艺的实用性。2.3.2 合格标准

每片含五味子醇甲以五味子醇甲计不得少于0.56mg。

2.3.3 检测结果对比

每批取样一次进行样品检测，以确认提取工艺的重现性，结果如表4所示。

表4 各指标检测结果

检测结果表明：颗粒含量、素片含量、薄膜衣片含量等均符合质量标准，表明优选的肝加欣片提取工艺稳定可靠。

3 结语

本研究运用正交试验法优选肝加欣片提取工艺，优选的提取工艺操作简便，切实有效，为提高肝加欣片中五味子醇甲的含量提供了新的提取方法，且经验证该方法可用于实际生产。