津力达颗粒中苦参碱和氧化苦参碱及槐定碱鉴别方法的研究

王淑静 范文成 王刚 张文玲

津力达颗粒为石家庄以岭药业股份有限公司研发的中药新药, 已收载于2010年版《中国药典》第三增补本, 处方由苦参、人参、黄精、苍术(炒)、黄连等十几味中药组成,具有益气养阴、健脾运津的功效, 用于2型糖尿病气阴两虚证［1］。本文对其苦参碱、氧化苦参碱及槐定碱的鉴别方法进行了研究, 建立了薄层色谱法的质量控制, 为本公司生产津力达颗粒的内控质量标准提供了可靠的参考依据。

1 仪器与试剂

CAMAG TLC VISUALIZER(瑞士卡玛薄层成像系统)。苦参碱对照品(批号：110805-201709), 氧化苦参碱对照品(批号：110780-201508), 槐定碱对照品(批号：110784-201706),以上对照品均购自中国食品药品检定研究院。津力达颗粒(批号：A1510002、A1606008、A1704008)。自制2%氢氧化钠硅胶G板。薄层层析硅胶G粉(青岛鼎康硅胶有限公司,批号：201710), 氢氧化钠(北京化工厂, 批号：201606), 所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

采用TLC对津力达颗粒中苦参碱和氧化苦参碱及槐定碱成分进行鉴别［2-5］：①供试品溶液制备：取津力达颗粒适量, 研细, 称取粉末约5 g, 加浓氨试液0.5 ml、二氯甲烷30 ml, 用密封条密封, 冷藏于冰箱, 放置过夜, 过滤, 滤液蒸干, 残渣加二氯甲烷0.5 ml使溶解, 作为供试品溶液。②对照品溶液制备：取苦参碱对照品、槐定碱对照品, 加甲醇制成浓度为0.5 mg/ml的混合溶液, 作为混合对照品溶液。另取氧化苦参碱对照品, 加甲醇制成浓度为0.5 mg/ml的溶液, 作为对照品溶液。

按照《中国药典》2015年版四部通则0502［6］试验, 吸取苦参碱和氧化苦参碱混合对照品溶液4 μl, 供试品溶液20 μl,分别点于同一块用2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以甲苯-正己烷-甲醇(8∶3∶0.5)为展开剂, 展开, 取出,晾干, 再用冰箱中10℃以下, 隔夜放置的上层溶液甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶4∶2∶1)为展开剂, 展开, 取出, 晾干,喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同的橙红色斑点。见图1。

图1 1、5为苦参碱和槐定碱混合对照品, 2～4为供试品；其中上端的斑点为苦参碱, 下端的斑点为槐定碱

按照《中国药典》2015年版四部通则0502［6］试验, 吸取氧化苦参碱对照品溶液4 μl, 供试品溶液20 μl, 分别点于同一块用 2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上, 再用冰箱中10℃以下, 隔夜放置的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(5∶0.6∶0.3)下层溶液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上,显相同的橙红色斑点。见图2。

图2 1、5为氧化苦参碱对照品, 2～4为供试品

3 讨论

3.1 薄层层析硅胶G的选择 分别采用3所不同生产厂家的薄层层析硅胶G粉, 自制2%氢氧化钠硅胶G板, 进行津力达颗粒的上述鉴别实验, 实验结果表明, 采用青岛鼎康硅胶有限公司的硅胶G粉铺的薄层板, 进行该品种的上述鉴别实验, 斑点分离效果较好。

3.2 展距的选择 在相同的色谱条件下, 分别考察了展距为8、9、10、11 cm斑点的Rf值, 实验结果表明, 苦参碱和槐定碱上行展开9 cm, 氧化苦参碱上行展开10 cm, 主斑点的Rf较大, 分离效果更好, 且专属性强, 阴性样品也无干扰［7-9］。

3.3 稳定性考察 供试品处理后, 放置第2天, 点板, 展开后, 斑点清晰, 说明溶液在24 h内稳定。

3.4 通过上述实验条件的选择, 采用手铺板, 对津力达颗粒效期内的样品进行了上述鉴别试验, 重复性较好, 且专属性强。