HPLC梯度洗脱测定黄芪叶中鼠李柠檬素葡萄糖苷的含量

【摘 要】 目的：建立HPLC梯度洗脱测定黄芪叶中量大成分鼠李柠檬素3-O-β-D-葡萄糖苷的含量。方法：HPLC法；色谱柱：Diamonsil-C18（5?m， 4.6nm×250nm）；流动相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脱（0～45min， 10%A→85%A），流速1.0mL·min-1，检测波长266.9nm，柱温25℃。结果：鼠李柠檬素3-O-β-D-葡萄糖苷在2.1～33.0?g范围内呈良好线性关系（r = 0.9999），平均加样回收率（n=9）99.3%，RSD=1.35%；6批黄芪叶中鼠李柠檬素3-O-β-D-葡萄糖苷平均含量为0.44%。结论：该方法准确、简单、具有良好的重复性和稳定性，为黄芪叶质量控制提供了科学的依据。

【关键词】 黄芪叶；含量测定

黄芪叶具有良好的抗炎、抗肿瘤、抗病毒、能有效的保护肝脏，降血糖等作用[1]。叶中主要含黄酮和皂苷类成分[2]。本文建立了黄芪叶中鼠李柠檬素3-O-β-D-葡萄糖苷含量测定方法，并比较6个批次黄芪叶鼠李柠檬素3-O-β-D-葡萄糖苷的含量，为评价黄芪叶的质量控制和综合开发利用提供了科学依据。

1 实验仪器、材料和试剂

1.1仪器

Waters 2695型高效液相色谱仪，四元梯度泵，2996型PDA检测器；梅特勒AL204天平（Mettler-Toledo Group）；梅特勒AB265-S天平（Mettler-Toledo Group）。

1.2试药

鼠李柠檬素3-O-β-D-葡萄糖苷由实验室自制，结构经MS、IR和NMR确证，HPLC （峰面积归一化法）纯度>98.5%；甲醇（色谱纯，Dikma公司）；水为超纯水；其余试剂为分析纯。

黄芪叶于2010年采集于黑龙江省大兴安岭，经黑龙江中医药大学王振月教授鉴定为膜荚黄芪的干燥叶。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的配制

精密称取对照品鼠李柠檬素3-O-β-D-葡萄糖苷4.13mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并加至刻度，摇匀，配制成0.413mg/mL鼠李柠檬素3-O-β-D-葡萄糖苷的对照品液。

2.2 供试品溶液的制备

取黄芪叶，粉碎，过4号筛，精密称取约2.0g，置圆底烧瓶中，精密加甲醇50mL，称定重量，加热回流4个小时，放冷，再称定重量，甲醇补足减少的重量，混匀，滤过，精密取续滤液25ml，收干溶剂，残渣加甲醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即为供试品。