沉默纤维介素2基因表达对急性坏死性胰腺炎小鼠的治疗作用

邵利梅 叶晓华 丁进

纤维介素2(fibrinogen-like protein 2, FGL2)为纤维蛋白原超家族成员，在体内存在两种形式，即膜型FGL2(mFGL2)和分泌型FGL2(sFGL2)，mFGL2具有凝血酶原酶活性，可通过介导各脏器内微血栓的形成引起器官损伤，sFGL2是T细胞的效应分子，发挥免疫调节活性，防止组织损伤[1]。Xi等[2]报道，沉默MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠的FGL2基因表达可减轻肝细胞的坏死和凋亡。叶晓华[3]报道，急性坏死性胰腺炎(acute necrotic pancreatitis, ANP)大鼠胰腺组织FGL2 表达升高，且与细胞凋亡密切相关。故本研究构建携带靶向FGL2的小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)的腺病毒(Ad-FGL2-siRNA) ，探讨FGL2在ANP小鼠胰腺细胞凋亡中的作用及机制。

材料与方法

一、材料及试剂

健康SPF级雄性C57/BL小鼠由上海实验动物研究中心提供。饲养在安静、恒温恒湿、12 h自然光照与黑暗交替、食水持续供给的环境中，所有操作均遵守浙江大学金华医院动物保护条例。牛磺胆酸钠购自美国Sigma公司，ELISA试剂盒购自北京四正柏生物科技有限公司，SYBR Green Master Mix购自美国Life technologies公司，FGL2抗体购自美国Santa Cruz公司，EnVision试剂盒购自丹麦Dako公司，TUNEL凋亡试剂盒购自瑞士Roche公司。

二、动物分组及模型制备

实验前动物禁食12 h，不禁水。采用腹腔内注射10%水合氯醛(2 ml/kg体重)麻醉，将小鼠分为对照组、ANP组、Ad-FGL2-siRNA组，每组6只。对照组开腹轻翻动胰腺组织后关腹；ANP组采用胰胆管逆行注射4%牛磺胆酸钠溶液(1 ml/kg体重)方法诱导ANP模型；Ad-FGL2-siRNA组在造模前经尾静脉注射0.5 ml 4×108pfu/ml的Ad-FGL2-siRNA。对照组及ANP组经尾静脉注射等剂量不携带Ad-FGL2-siRNA的腺病毒。术后6 h处死小鼠，抽取下腔静脉血0.5 ml，分离血清，置-20℃冰箱保存；取胰腺组织标本，部分置于4%多聚甲醛保存，部分经液氮速冻后置-80C°冰箱保存。……