桔梗最优提取工艺研究

王船英

(安徽医学高等专科学校 安徽合肥 230601)

为了更好地开发利用桔梗的药用价值，国内外大批专家学者对其提取工艺进行了大量的研究[1]。该课题通过设计单因素实验和三因素三水平正交试验对桔梗提取工艺进行考察分析，为桔梗的进一步开发和利用提供参考。

1单因素实验设计

1.1加水量的研究

选取加水量为6倍、8倍和10倍时，称取5g粉末，提取温度为80℃，提取次数为1次，提取时间为1h时，研究加水量对浸膏率的影响，详见表1和图2。

表1 加水量对浸膏率的影响

图1 加水量对出膏率的关系图

由图1可以看出，随着加水量依次升高，浸膏提取率依次增加，在加水量为6倍水时，提取率较低，加水量为12倍水时，提取率最高。综合考虑，选取8倍、10倍、12倍三个水平进行正交试验。

1.2提取时间的研究

选取提取时间为0.5h、1h、1.5h和2h时，提取温度为80℃，提取次数为1次，加水量为8倍水时，研究提取时间对浸膏率的影响，见表2和图2。

表2 提取时间对浸膏率的影响

图2提取时间对出膏率的关系图

根据表2和图2可以看出，随着提取时间依次增加，从0.5h到1.5h浸膏率显著增加，1.5h到2h出膏率增速减缓，提取时间为2h时，浸膏率达到最高。从工厂生产的经济效益考虑，选取1.5h为最佳提取时间。综合考虑，选取0.5h、1h、1.5h三个水平进行正交试验。

1.3提取次数的研究

选取提取次数为1次、2次、3次时，提取温度为80℃，提取时间为1h，加水量为8倍水时，研究提取次数对浸膏率的影响，见表3和图3。

表3 提取时间对浸膏率的影响

图3提取次数对出膏率的关系图

根据实验结果可知，当提取次数依次增加时，从1次到3次，浸膏率呈明显上升趋势。第3次时，浸膏率最高，故选取3次为最佳提取次数。综合考虑，选取1次、2次、3次进行正交实验设计。结论：根据单因素实验的结果，得出最优提取条件应该是：加水量为10倍，提取时间为1.5h，提取次数为3次。

2正交实验设计

依据单因素实验结果设计正交实验,以出膏率为考察指标,优化出桔梗提取物的最佳提取工艺。

经过单因素实验，得出提取时间为1.5h，提取次数为3h，加水量为10倍水的最优提取条件，由于实验条件的设置不精确，实验变量的设置不具体，故有必要做一次正交试验设计，此正交试验设计以三因素四水平正交表(见表4)，围绕单因素实验得出的最优条件，上下波动取值。因正交表中有空列以计算实验误差项，故每次实验均重复3次，取其平均值计算。

表4 正交试验结果

2.1正交试验出膏率检查

表5 正交试验出膏率情况

2.2正交试验中桔梗皂苷D含量测定

2.2.1色谱条件 ①高效液相色谱仪:Waters1525二元高压泵和Waters2489紫外检测器。②色谱柱:大连依利特C18色谱柱(4.6mm×250mm,10μm)。③流动相:乙腈-水(28:72)[2]。④检测波长:210nm。⑤流速:1ml/min。⑥柱温:30℃ 。⑦进样量：20μL。

2.2.2 对照溶液的制备 精密称取桔梗皂苷D对照品2mg，至10mL量瓶中，加甲醇到刻度，再精密吸取1mL，置于10mL量瓶中，加甲醇到刻度，即得浓度为0.02mg/ml的对照品溶液。

2.2.3 供试品的制备

精密称定1g浸膏，加水5mL将其超声溶解，过0.22μm微孔滤膜，即得。

2.2.4桔梗皂苷D含量测定

取9批供试品溶液进行HPLC分析。结果见下表所示。经计算，9批供试品中桔梗皂苷D含量在0.01%-0.05%之间，见表6。

表6 供试品溶液HPLC测定结果

2.3评价指标

对提取得到的干浸膏中的桔梗皂苷D含量及浸膏率进行测定，以此为指标优选桔梗皂苷D的最佳提取工艺，根据综合评分法(综合评分=桔梗皂苷含量*70%+出膏率*30%)，计算综合评分，并以该综合评分为评价指标。结果见表7所示。

表7 桔梗皂苷D提取工艺的综合评分

根据正交实验结果可知，提取次数和提取时间对实验结果影响最大，加水量对实验结果影响最小。故可以得出结论，以桔梗出膏率和桔梗皂苷D含量为考察指标的最佳提取工艺为A1B3C3，即加水量为8倍、提取1.5h、提取3次为最优提取方案。