高效液相色谱法测定磷酸左奥硝唑酯二钠的含量

杨成 陆华龙（通讯作者）（陕西合成药业股份有限公司 陕西 西安 715100）

磷酸左奥硝唑酯二钠为化学药物1.1类新药。该新药为奥硝唑的左旋异构体磷酸酯衍生物的钠盐，作为左旋奥硝唑的前体药物，磷酸左奥硝唑酯二钠在体内可以迅速分解为有效成分左旋奥硝唑而起到抗厌氧菌的作用。主要用于：用于治疗由脆弱拟杆菌、狄氏拟杆菌、多形拟杆菌、普通拟杆菌、梭状芽胞杆菌、真杆菌、消化球菌和消化链球菌、幽门螺杆菌、黑色素拟杆菌、梭杆菌、牙龈类杆菌等敏感厌氧菌所引起的多种感染性疾病。迄今为止，尚未见磷酸左奥硝唑酯二钠的含量方法的相关报道，鉴于此，我们研究开发了磷酸左奥硝唑酯二钠的含量测定方法采用高效液相色谱法测定，旨在寻找一种更加科学合理的检测方法。

1.仪器与试药

仪器：美国 Thermo U3000高效液相色谱仪，包括 U3000四元泵，U3000可变检测波长, U3000柱温箱，U3000自动进样器。

试药：磷酸左奥硝唑酯二钠由陕西合成药业股份有限公司提供。

对照品：磷酸左奥硝唑酯二钠由陕西合成药业股份有限公司提供。

甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2.方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Welch，XtimateTM-C18，（4.6×250mm Column 5-Micron）检测波长：321nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；流动相：以含0.01%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用三乙胺调pH至6.5）-甲醇（85：15）。理论板数按磷酸左奥硝唑酯二钠峰计算应不低于2500。

2.2 对照品溶液的制备

取磷酸左奥硝唑酯二钠对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每 1ml约含磷酸左奥硝唑酯二钠0.04mg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取磷酸左奥硝唑酯二钠适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每 1ml约含磷酸左奥硝唑酯二钠0.04mg的溶液， 即得。

2.4 专属性试验

取流动相溶液按上述色谱条件测试。结果在磷酸左奥硝唑酯二钠对照品出峰位置未见其它杂质的干扰峰(见图1～3)，说明按本文的试验条件测定， 空白溶剂无干扰。

图1 空白溶剂图谱

图2 供试品溶液图谱

图3 对照品溶液图谱

2.5 线性关系考察

精密称取磷酸左奥硝唑酯二钠对照品适量，用流动相溶解并稀释成每1ml含磷酸左奥硝唑酯二钠91.8、81.6、71.4、61.2、51.0、40.8、30.6、20.4ug的溶液，精密量取各溶液20µl注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积Y为纵坐标，以浓度X为横坐标，绘制标准曲线，见表1。

表1 含量测定标准曲线

结论：线性回归方程Y=0.5341X+0.7177 R2=0.9994 n=8磷酸左奥硝唑酯二钠在91.8～20.4µg/ml的浓度范围内线性关系较好。

2.6 重复性试验

精密称取磷酸左奥硝唑酯二钠供试品适量，共六份，分别用流动相溶解并稀释制成含磷酸左奥硝唑酯二钠40ug/ml的溶液，作为供试品溶液，精密称取磷酸左奥硝唑酯二钠对照品适量，用流动相溶解并稀释制成含磷酸左奥硝唑酯二钠40ug/ml的溶液，作为对照品溶液。取供试品和对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，试验结果见表2。

表2 磷酸左奥硝唑酯二钠含量测定重复性结果

2.7 溶液稳定性试验

精密称取磷酸左奥硝唑酯二钠对照品适量，用流动相溶解并稀释制成含磷酸左奥硝唑酯二钠40ug/ml的溶液，室温下放置0、2、4、6、8、10、12小时后测定，结果见表3。

表3 含量测定溶液放置稳定性

2.8 回收率试验

供试品溶液的制备：精密称取磷酸左奥硝唑酯二钠32mg、40mg、48mg各三份，分别置9个10ml量瓶中，分别用流动相溶解，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，用上述溶剂稀释制成每1ml中约含磷酸左奥硝唑酯二钠32ug、40ug、48ug的溶液，即得80%、100%、120%的样品溶液各三份；另精密称取磷酸左奥硝唑酯二钠对照品适量，同法制成每1ml约含磷酸左奥硝唑酯二钠40ug的溶液，作为对照品溶液，照上述色谱条件测定，计算出本品含量测定的回收率，结果见表4。

表4 含量测定回收率试验结果

2.9 含量测定

取磷酸左奥硝唑酯二钠适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含磷酸左奥硝唑酯二钠0.5mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取20µl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取磷酸左奥硝唑酯二钠对照品适量，精密称定，同上操作，作为对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，结果见表5。

表5 含量测定结果

3.讨论

我们选用高效液相色谱法测定磷酸左奥硝唑酯二钠的含量，使其和制剂测定方法相统一，减少各方法间的误差，准确的控制制剂生产各环节的含量，避免因原料含量中磷酸左奥硝唑酯二钠测定过高，导致投料量小，给中间体和成品带来含量过低重新加料的麻烦。