shRNA介导的波形蛋白基因沉默对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响

柳 严，张德林，王国良，赵鹏伟，黄建钊

贵州省人民医院肝胆外科 贵阳 550002

原发性肝癌是一种常见的起源于肝脏上皮或间叶组织的消化道恶性肿瘤，具有发病隐匿、进展快和早期诊断困难等特点，其发病率和病死率一直居高不下，且有升高的趋势，严重威胁着人类的生命安全[1-2]。其中，浸润转移是导致肝癌患者死亡加速和手术治疗成功率低的重要原因。因此，寻找能够阻断肝癌细胞浸润和转移的有效分子靶点，一直是肝癌领域研究的热点问题。波形蛋白(Vimentin)是一种中间丝蛋白，广泛表达于正常的间质细胞，与上皮间质转化关系密切。研究[3-6]发现，Vimentin在宫颈癌、口腔癌和乳腺癌等多种肿瘤中异常高表达，与肿瘤的转移密切相关；干扰或沉默Vimentin表达，可抑制肿瘤的转移。近年来，有研究[7]指出Vimentin在肝癌组织中高表达，与肿瘤的病理分级和远处转移等有关，但其具体的作用机制不详。本研究构建了靶向Vimentin基因的慢病毒LV-Vimentin-GFP-shRNA，感染肝癌Huh7细胞，建立Vimentin基因稳定沉默的Huh7细胞，观察沉默Vimentin表达对Huh7细胞迁移和侵袭能力的影响，并探讨其可能的分子机制，以期为肝癌的治疗提供新的靶点。

1 材料与方法

1.1材料、试剂和仪器肝癌Huh7细胞购于中国科学院上海细胞库。pLVTHM载体购于上海吉凯公司。Trizol试剂购于美国Invitrogen公司，胎牛血清购于美国Sigma公司，RPMI 1640培养基和胰蛋白酶购于美国Gibco公司。BCA蛋白浓度测定试剂盒购于北京索莱宝科技公司，反转录试剂盒购于日本TaKaRa公司，β-actin抗体、MMP-9抗体和受体酪氨酸激酶(AXL)抗体购于美国Santa Cruz公司，辣根过氧化物酶标记的二抗购于美国Zymed公司。……