东海中华管鞭虾多酚氧化酶（PPO）的纯化及特性研究

吕敏，黄光华，杨慧赞，王瑞，马华威，甘晖，曾兰，相兴伟

（1.广西壮族自治区水产科学研究院，广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室，广西南宁 530021）（2.浙江省海洋开发研究院，浙江舟山 316000）（3.广西水产畜牧学校，水产养殖研究室，广西南宁 530021）

关键字：中华管鞭虾；多酚氧化酶(PPO)；酶学性质；纯化

虾类在储藏和运输过程中，其体内多酚氧化酶(polyphenoloxidase，PPO)诱导的黑变大大降低了虾的品质和市场价值，造成巨大损失[1]。因此，我们需要获取的高纯度的PPO，并对其特性进行研究，为了有效地控制中华管鞭虾在运输和储藏过程的黑变提供参考。黑变发生主要是PPO诱导酚类化合物生成醌，醌非酶聚合促进高分子不溶性黑色素沉淀，造成虾黑变[2]。研究发现，由于虾体内的酚类化合物含量高以及纯化过程中这些酚类物质易于与 PPO形成不可逆结合，给从虾类获得高纯均一的PPO带来了困难[3]。目前，国内外研究了挪威龙虾(Nephrops norvegicus)、日本对虾(Marsupenaeus japonicus)、佛罗里达龙虾(Panulirus argus)、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的PPO纯化技术和酶特性[4,5]，比如Zotos和Taylorp等研究了挪威龙虾 PPO的部分提纯工艺和在黑变激活机制中的作用[6]；Encarnacion等[7]发现蘑菇提取活性物对日本对虾黑变具有抑制作用；Manheem等[8]报道称，不同冷藏条件下凡纳滨对虾PPO变化不同，温度与PPO活性呈反比，温度越低其活性较弱；Ali等[9]报道了佛罗里达龙虾黑变的PPO提纯和激活机制，Nirmal等[10]研究了凡纳滨对虾 PPO纯化手段和生物学特性。

国内初步研究了中华管鞭虾(Solenocera crassicornis) PPO的提纯手段和部分生物特性，主要匀浆浸、硫酸铵无分级沉淀提纯，并调查了该PPO在各组织分布、选取部分底物研究酶特性，以及筛选抑制剂[11～15]，国外未见相关报道。……