精子DNA碎片率对辅助生殖结局的影响分析

漆艳萍 彭洁 戚青林

[摘要]目的 分析精子DNA碎片率对辅助生殖结局的影响。方法 选择2015年6月～2017年6月在我院接受辅助生殖（体外受精-胚胎移植）治疗的325例患者为研究对象，依据DNA碎片率（DFI）的不同分为A组（DFI≤17.6%）、B组（17.6%0.05）；②A、B、C三组受精率比较，差异有统计学意义（P<0.05），A、C两组及B、C两组卵裂率、优质胚胎率比较，差异有统计学意义（P<0.05）；A、B两组卵裂率、优质胚胎率比较，差异无统计学意义（P>0.05）；③A、B、C三组生化妊娠率、临床妊娠率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 精子DNA碎片率对辅助生殖结局无显著性影响，但一定程度上会对受精结局造成影响。

[关键词]精子；DNA碎片率；辅助生殖结局

[中图分类号] R714.8 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）11（b）-0101-03

[Abstract] Objective To analyze the effect of sperm DNA fragmentation index （DFI） on assisted reproductive outcomes. Methods A total of 325 patients who underwent adjuvant reproductive （fertilization-embryo transfer in vitro） treatment from June 2015 to June 2017 were enrolled in the study. They were divided into groups A （DFI≤17.6%）， B（（17.6%0.05）. The differences of fertilization rates among three groups were significant. To be specific， the cleavage rates and high quality embryo rates between group A and group C， and group B and group C （P<0.05）， while no much difference between group A and group B （P>0.05）. The biochemical pregnancy rate and clinical pregnancy rate of the three groups didn′t differ statistically （P>0.05）. Conclusion Sperm DFI has no significant effect on assisted reproductive outcomes， but it will affect the outcome of fertilization to some extent.

[Key words] Sperm； DNA fragmentation index； Assisted reproductive outcome

近年來，我国不孕不育的人数呈不断增多的趋势，不孕不育的影响因素有多种，如环境污染严重、生活习惯的改变以及精神压力过大等，不孕不育不仅影响家庭和谐，还会给患者心理造成一定负担，严重影响患者的身心健康[1]。临床经验显示，所有不孕不育患者中，至少有50%是由男方因素造成的，过去临床常采用精液常规分析对男性生育能力进行判断，但该方法无法取得理想的效果。随着实验室检测技术的不断发展，精子DNA检测方法应用在临床，并且成为临床重点研究课题[2]。本研究重点对精子DNA碎片率对辅助生殖结局的影响效果进行分析，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选择2015年6月～2017年6月于我院接受辅助生殖（体外受精-胚胎移植）治疗的325例患者作为研究对象，经过医院医学伦理委员会批准。纳入标准：夫妻双方染色体检查结果正常，单纯由女性输卵管因素导致不育，且女性年龄在36周岁以下。排除重度少弱精子症患者，中途退出本研究或放弃治疗等[3]。依据DNA碎片率（DFI）的不同分为A组（DFI≤17.6%）、B组（17.6%0.05），具有可比性。

1.2检测方法

①精液标本用生理盐水调整浓度为500～1000万/ml（密度为100×106左右，一般为90 μl生理盐水+10 μl精液）。②溶液A溶解（90～100℃）5 min，放置在37℃恒温箱5 min，加入30 μl精液混合。③20 μl琼脂糖精液加入到玻片上，盖上盖玻片，放置在4℃冰箱5 min。④从冰箱中取出后，立即放入溶液B（母液1 ml加入9 ml蒸馏水混匀，重复使用。）中7 min，放入溶液C（一次性使用）10 ml中25 min，然后分别浸入蒸馏水中1 min、75%乙醇5～8 min、100%乙醇1 min，取出后自然晾干。⑤染色：加溶液D 10滴染色2 min，加溶液E 10滴染色10 min（期间充分混匀），自来水下冲洗5 s，自然晾干后400倍镜下观察500个精子涂片形态[4]。

1.3观察指标及判定标准和计算方法

观察指标：①精液常规参数，包含精子浓度、精子正常形态率、前向精子百分率、总活力[5]。②体外受精（IVF）受精结局，包含受精率、卵裂率、优质胚胎率；③妊娠结局，包含生化妊娠率、临床妊娠率[6]。计算方法：①2PN受精率=2PN受精卵数/MII卵数×100%[7]。②2PN卵裂率=2PN卵裂数/2PN受精卵数×100%[8]。③优质胚胎率=优质胚胎数/2PN受精卵数×100%[9]。判定标准：①生化妊娠：发生在妊娠5周内的早期流产，血中可以检测到HCG升高，>25 mIV/ml或尿妊娠试验阳性，但超声波检查看不到孕囊，提示受精卵着床失败[10]。②临床妊娠：宫腔内见妊娠囊则为临床妊娠[11]。

1.4统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件对数据进行处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料用百分率（%）表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1三组精液常规参数的比较

A、B、C组精子浓度、精子正常形态率、前向精子百分率、总活力比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

2.2三组IVF受精结局的比较

三组受精率比较差异有统计学意义（P<0.05）；A与B组卵裂率、优质胚胎率比较，差异无统计学意义（P>0.05）；A与C组卵裂率、优质胚胎率比较，差异有统计学意义（P<0.05）；B与C组卵裂率、优质胚胎率比较，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。

2.3三组妊娠结局的比较

三组生化妊娠率、临床妊娠率比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表3）。

3讨论

不孕不育治疗的首要条件是对病因进行准确诊断，过去临床主要采用常规检查进行病因诊断，但接近一半比例的患者无法找到明确的病因，无法得到有效的治疗[12]。随着近些年医疗水平的进步，相关学者指出，精子DNA碎片率异常可能是造成不孕不育的原因之一，即使是常规检查结果正常的患者，精液中也可能存在较高比例的DNA结构损伤的精子[13]。精子DNA碎片化的机制有多种，如精子异常凋亡、氧化应激及精子发生过程中的染色质组装异常等。精子异常凋亡是指生理、病理条件下发生的以细胞核为表现的细胞死亡，而精子暴露在过量的氧分子中，可能造成多聚不饱和脂肪酸的过氧化，导致精子细胞膜结构受损，并且精子核染色质的组装过程容易受到机体内外环境有害因素干扰，导致精子遗传物质方面出现缺陷[14]。目前国外部分生殖中心已经开展精子DNA碎片率的检测，并应用在辅助生殖结局的预测，但国内外学者关于精子DNA碎片率检测得出的结论存在较大差异，关于精子DNA碎片率对辅助生殖结局的影响存在争议[15]。本研究主要以我院接受辅助生殖（体外受精-胚胎移植）治疗的325例患者为研究对象，回顾性比较分析DNA碎片率的不同对精液常规参数、IVF受精结局及妊娠结局的影响，本研究结果显示，DNA碎片率的不同对精液常规参数（包含精子浓度、精子正常形态率、前向精子百分率、总活力）无显著影响，DNA碎片率越高受精率越低，高DNA碎片率对卵裂率、优质胚胎率会造成一定程度影响。

综上所述，对精子DNA碎片进行研究有重要意义，可为辅助生殖结局预测提供相应依据，对精子DNA碎片率高的患者早发现、早治疗，可提高助孕的有效性。由于本实验样本有限，实验结果需要大量样本做进一步研究，本实验结果仅供临床作为参考。

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（收稿日期：2018-04-26 本文编辑：崔建中）