γδ T细胞对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞杀伤作用的实验研究

陶林芬， 廖 容， 王纪珍， 曾志勇， 邱东飙， 陈君敏

多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是异常浆细胞增生的一种恶性肿瘤。以骨骼破坏、骨质疏松、肾功能损害和免疫球蛋白异常为主要临床表现。近年来，随着新的治疗药物如免疫调节剂和蛋白酶体抑制剂等的出现以及自体造血干细胞移植的应用，MM的治疗疗效已有明显提高。但由于骨髓瘤细胞的耐药性特点，MM仍被认为是不可治愈的疾病[1]。不断探索更好的药物和方法来治疗MM，仍是目前该领域的研究重点。

近年来，细胞免疫治疗在血液肿瘤研究中取得了重要进展，已成为治疗血液恶性肿瘤的重要手段[2-3]。γδ T细胞是表达TCR γδ的T细胞亚群，是一种既能杀伤肿瘤细胞及肿瘤干细胞，又能识别癌抗原的免疫细胞，杀伤性较强，且无组织相容性抗原(major histocompatibility antigen，MHC)限制性。γδ T细胞在体内的数量虽然较少，但在体外用磷酸抗原激活和IL-2刺激下可大量扩增，并具有强大的抗肿瘤作用[4-5]。由于MM是一种伴有严重免疫功能紊乱的肿瘤，表现为γδ T细胞的数量或功能异常[6]。因此，本研究通过体外研究γδ T细胞对MM细胞杀伤及凋亡方面的作用，以期为MM的细胞免疫治疗提供理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1试剂 人MM细胞株RPMI 8226(美国ATCC公司)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，美国Gibco公司)；人淋巴细胞分离液(天津灏洋生物制品有限公司)；RPMI 1640培养基(美国Hyclone公司)；唑来膦酸(Zol，中国恒瑞公司)；重组人白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2，美国Peprotech公司)；Anti-human γδ TCR mAb(法国Immunotech公司)；Anti-human NKG2D mAb和Anti-mouse IgG mAb(美国eBioscience公司)；Anti-human CD3 mAb(美国Miltenyi Biotec公司)；Cyto Tox 96®非放射性细胞毒性试剂盒(美国Promega公司)；AnnexinV/PI试剂盒(中国Beyotime公司)；CCK-8试剂盒(日本同仁化学研究所)。……