东至县奶牛乳房炎致病原的分离鉴定与耐药性分析

付旭东

奶牛乳房炎是指奶牛乳腺受到刺激后所发生的一种炎性疾病，是奶牛养殖中的常见病和多发病，严重阻碍了奶牛业的健康发展和奶制品的食品安全。为掌握当前引起东至县奶牛乳房炎的主要致病原以及主要致病原的耐药性情况，本研究对188份奶牛乳样进行了致病原的分离鉴定与耐药性分析，为东至县奶牛乳房炎的临床合理用药和综合防控提供了科学的指导依据。

1材料和方法

1.1生化鉴定管、药敏纸片

细菌生化反应管购自杭州天和微生物试剂有限公司；药敏纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司。

1.2样品的采集

采自东至县奶牛场的奶牛乳样共188份。

1.3致病原的分离培养、纯化与形态特征观察

将乳样分别接种于普通营养琼脂、绵羊血琼脂、麦康凯琼脂和S-S琼脂培养基，置于37℃中培养24～48h，选择典型的单个菌落进行纯化培养，并进行革兰氏染色和镜检观察。在普通琼脂和绵羊血琼脂平板上形成圆形、整齐、光滑、湿润的单菌落，普通琼脂上呈金黄色，绵羊血琼脂上具有溶血环，染色镜检可见形态呈圆形或椭圆形、葡萄串状排列的革兰氏阳性菌，则初步判断为金黄色葡萄球菌。在普通琼脂平板上不生长，在绵羊血琼脂平板上形成圆形、半透明、光滑、湿润、灰白色的小菌落，具有透明的溶血环，染色镜检可见形态呈球形或卵圆形、短链状排列的革兰氏阳性菌，则初步判断为链球菌。在营养琼脂和麦康凯琼脂平板上形成圆形、半透明、光滑、整齐、湿润的单菌落，普通琼脂上呈灰白色，麦康凯琼脂上呈红色，绵羊血琼脂上具有溶血环，S-S琼脂不生长或生长很差，染色镜检可见形态呈短杆状、两端钝圆、散在或成对存在的革兰氏阴性菌，则初步判断为大肠杆菌。在S-S琼脂平板上形成光滑、整齐、湿润、无色、半透明、中等大小的单菌落，染色镜检可见形态呈杆状、两端钝圆、散在排列的革兰氏阴性菌，则初步判断为沙门氏菌。

1.4分离菌株生化鉴定试验

根据表1中球菌、杆菌的主要生化特性对分离菌株进行生化鉴定。

1.5药敏试验

采用K-B涂布法测定致病菌对常用药物的敏感性，分析东至县奶牛乳房炎主要致病原的耐药性。

2结果与分析

2.1致病原分离鉴定结果

通过分离纯化、培养特性、菌落形态、镜检形态、生化特性等方法对188份乳样进行致病原的分离鉴定，共成功分离鉴定出89株致病原。其中金黄色葡萄球菌共分离鉴定出37株，感染率为19.68%链球菌29株，感染率为15.42%（无乳链球菌8株，感染率为4.25%；停乳链球菌9株，感染率为4.79%；乳房链球菌12株，感染率為6.38%）；大肠杆菌23株，感染率为12.23%。表明引起东至县奶牛乳房炎的致病菌主要为金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌，且以金黄色葡萄球菌的感染最为突出。

2.2药敏试验结果

37株金黄色葡萄球菌对庆大霉素、氯霉素、环丙沙星、头孢氨苄、恩诺沙星、氟苯尼考等药物较敏感，对青霉素、氨苄青霉素、复方新诺明、四环素已产生较强的耐药性，其中对青霉素和氨苄青霉素的耐药率80%。29株链球菌对庆大霉素、氟苯尼考、头孢氨苄、环丙沙星等药物较敏感，对链霉素、四环素、红霉素、氨苄青霉素、青霉素、复方新诺明已产生较强的耐药性，其中对链霉素、四环素的耐药率高达70%以上。23株大肠杆菌对头孢氨苄、庆大霉素、氟苯尼考、氯霉素等药物较敏感，对复方新诺明、氨苄青霉素、红霉素、青霉素已产生较强的耐药性，其中对复方新诺明的耐药率高达78.26%。该结果表明引起东至县奶牛乳房炎的主要致病菌已对部分常见药物产生了较强的耐药性。

3讨论

本研究通过对东至县奶牛乳样进行致病原的分离鉴定，表明引起东至县奶牛乳房炎的主要致病菌为金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌，且以金黄色葡萄球菌的感染最为突出。随后本研究对金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌进行了耐药性分析，发现金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄青霉素、复方新诺明、四环素已产生较强的耐药性，链球菌对链霉素、四环素、红霉素、氨苄青霉素、青霉素、复方新诺明已产生较强的耐药性，大肠杆菌对复方新诺明、氨苄青霉素、红霉素、青霉素已产生较强的耐药性。表明青霉素、氨苄青霉素、复方新诺明等药物可能为东至县奶牛乳房炎防治中的常用药物，奶牛乳房炎主要致病菌对这些药物已产生了较强的耐药性，应加强重视。建议奶牛场结合实际情况重新针对性、合理性选择用药，尽量交叉用药，提高治疗效果，避免耐药性的进一步产生。本研究是国内首次对东至县奶牛乳房炎的致病原进行鉴定与分析，为东至县奶牛乳房炎临床合理用药以及综合防控措施的制定与优化提供了宝贵的参考资料。