pH值对奥硝唑氯化钠注射液含量及有关物质的影响

郝 哲 张素娜 刘 元 王丽军

(中国人民解放军第153中心医院 郑州 450042)

奥硝唑氯化钠注射液在临床上广泛用于治疗敏感厌氧菌所引起的腹部、盆腔、口腔、外科和脑部等部位的多种感染性疾病[1]。它的主要已知杂质有2-甲基-5-硝基咪唑及2-甲基-5-硝基-1-(2,3-二羟基丙基)咪唑[2]。有关物质量的多少直接影响到临床疗效及不良反应发生率，因此有必要优化生产工艺，制备出优质高效的制剂。在原标准WS-043(X-039)-2002中规定pH范围为3.5～5.5，在标准WS1-(X-035)-2012Z中规定pH值范围为3.0～4.0，pH值范围缩小，表明pH值对奥硝唑氯化钠注射液质量的影响起着至关重要的作用。人体可耐受pH范围为4～9，pH<4时，易导致刺激疼痛及静脉炎[3]。本文结合生产实际，确定最佳pH值，优化最佳工艺，保证产品质量，确保临床用药安全可靠。

1 仪器与试药

岛津LC-10A型高效液相色谱仪，包括SPD-10A型紫外检测器、手动进样器、LabSoulations型色谱工作站(日本岛津公司)；BT 125D型电子天平(赛多利斯公司)。甲醇为色谱纯，水为超纯水。

奥硝唑氯化钠注射液，批号：1504231、1504232、1504233，规格：100ml ： 奥硝唑0.5g与氯化钠0.9g，本院自制。

奥硝唑对照品，批号：100608-201301，规格：100mg，由中国药品生物制品检定所提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：WondaSil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇-水(20∶80)为流动相，流速为1ml/min，检测波长为318nm。

2.2 溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备

取奥硝唑对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释成每1ml中含奥硝唑100μg的溶液，作为对照品溶液，图谱见图1。

取2-甲基-5-硝基咪唑对照品适量，加流动相稀释成每1ml中含2-甲基-5-硝基咪唑10μg的溶液。

2.2.2供试品溶液的制备

取本品，加适量0.1mol/L盐酸，调节溶液pH值分别为3.0，3.2，3.4，3.6，3.8，4.0。分别精密量取各供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中含奥硝唑100μg的溶液，图谱见图1。

2.2.3有关物质对照溶液的制备

分别精密量取各供试品溶液1ml，置100ml量瓶，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得，图谱见图1。

a 奥硝唑对照品溶液

b 奥硝唑有关物质对照溶液

c 氯化钠溶液

d 2-甲基-5-硝基咪唑溶液

e 奥硝唑有关物质溶液

f 奥硝唑含量测定溶液

注：1-NaCl；2-2-甲基-5-硝基咪唑3；4-有关物质；5-奥硝唑。

2.2.4空白试验

精密量取0.9%氯化钠溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，图谱见图1。

2.3 线性关系考察

精密称定奥硝唑对照品10.26mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取3.0、4.0、5.0、6.0、7.0分别置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。5种不同浓度的对照品溶液各精密量取20μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积。每个浓度平行进样3次，取其平均峰面积，以色谱峰面积(Y)对进样浓度(X)进行线性回归，得回归方程Y=60224X-21385 ，r=0.9999，表明样品浓度在61.6μg·ml-1～143.6μg·ml-1范围内，线性关系良好。

2.4 精密度试验

精取奥硝唑氯化钠注射液(1504231)适量，按照含量测定方法配成稀释溶液，按上述测定方法测定，平行操作5份，计算平均峰面积及其相对标准偏差，结果RSD为0.07%，表明该方法精密度良好。

2.5 稳定性试验

取奥硝唑氯化钠注射液(1504231)适量，按照含量测定方法配成稀释溶液分别于0、2、4、6、8h测定奥硝唑的含量，考察供试品溶液稳定性，计算平均峰面积及其相对标准偏差，结果结果RSD为0.10%，表明该方法稳定性良好。

2.6 回收率试验

精密称取奥硝唑适量，加入适量的氯化钠(氯化钠按100%投料)，制备含奥硝唑约相当于标示量的80%、100%、120%的供试品溶液，每一浓度平行制备3份，照含量测定方法测定。计算平均回收率及RSD值，结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=9)

序号实际浓度(μg/ml)测得浓度(μg/ml)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)180.1579.8799.65280.2380.1299.86379.9879.8199.794100.14100.0199.875100.23100.1299.896101.0899.8998.827120.34120.0599.768120.17120.0699.919120.24120.0799.8699.70.34

2.7 定量限和检测限

取2.2.1项下对照品溶液适量，分别加适量水稀释后测定，在信噪比为10∶1和信噪比为3∶1时计算定量限和检测限分别为1.2ng和0.4ng。

2.8 测定结果

取不同pH值的供试品溶液，依法测定，有关物质以自身对照法计算，含量测定以外标法计算，见表2、图2。

表2 不同pH值测定结果

pH值3.03.23.43.63.84.0有关物质(≤1.0%)0.830.800.770.540.820.86含量(%)98.098.198.298.598.398.4

图2 不同pH值测定结果图

3 结论

由结果可知，奥硝唑的含量与有关物质之间存在一定的相关性，有关物质量越多，含量相对略低，但不同pH值下，奥硝唑含量的RSD%为0.19%，奥硝唑有关物质的RSD%为15.1%。表明不同pH值对含量影响不大，但对有关物质影响较大，当pH值为3.6时有关物质量最少，故实际生产中，控制pH值为3.6，确保制剂安全有效。