3种微柱凝胶抗人球蛋白试剂卡的检测差异比较

杨 光，刘自强，吴艳红，杨 静，王 岚

(四川省人民医院输血科，四川 成都 610031)

微柱凝胶抗人球蛋白技术现已普遍应用于临床。但不同的试剂卡，由于生产厂家不同，操作步骤相异，造成灵敏度差异，导致试验结果出现不一致。本研究选取A、B卡2种进口卡和国产C卡进行平行比对，讨论其差异性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取本院交叉配血次侧不合住院病人标本97例。标本均为3 ml的EDTA- K2抗凝全血，3000 r/min 离心5 min，分离红细胞和血浆，标本均无溶血、脂血、凝集，血清蛋白异常。

1.2 仪器及试剂 (1)试管法：抗人球蛋白试剂(上海血液医药有限公司)，恒温水浴箱(天力医疗) 及Baso2005-1型离心机；(2)微柱凝胶法：A公司抗人球蛋白Liss/Coombs卡[A卡(批号：50531.02.05)]及其专用孵育器和离心机、 B公司抗人球蛋白Anti-IgG卡[B卡(批号：IGC623A)]及其专用孵育器和离心机、C公司抗人球蛋白Anti-IgG卡[C卡(批号：201511003)]及其专用孵育器和离心机。

1.3 阴阳性对照 (1)阳性对照细胞： 取3份正常人O型Rh(D)阳性红细胞等量混匀，经生理盐水洗涤3次后取少量压积红细胞，加IgG抗D血清，置37 ℃水浴致敏30 min，取出后用生理盐水洗涤3次，用低离子液配成5%红细胞悬液，离心备用。(2)阴性对照细胞： 取3份正常人O型红细胞等量混匀，经生理盐水洗涤后，用低离子液配成5%红细胞悬液，离心备用。将质控标本与检测标本一起检测，结果均在质控范围内。

1.4 方法 (1)试管法：将1滴受检者红细胞加入干净的小试管中，用盐水洗涤后以1000 r/min离心1 min，洗涤3次后，将上清液全部倒出，用低离子液配成5%红细胞悬液，取悬液1滴加入试管中，再加入抗人球蛋白血清1滴，摇匀，3000 r/min离心15 s观察结果，阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，盐水管不凝集，则受检管出现凝集为阳性，不凝集为阴性。(2)微柱凝胶法：将3种抗人球蛋白检测卡分别标记A、B、C卡，用生理盐水稀释患者红细胞到0. 8%浓度，分别加入50 μl于3种试剂卡中，将3种试剂卡分别放入对应的专用离心机中离心，B卡为5 min，A卡和C卡为15 min，取出观察结果。试管法参照《全国临床检验操作规程》[1]，微柱凝胶法所有操作严格按照SOP及试剂说明书进行。

1.5 统计学方法 采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 3种试剂卡及试管法检出率比较 3种试剂卡检出率间比较有显著性差异 (χ2=45.986，P<0.05)；试管法与A、B卡比较均无显著性差异(P>0.05)；试管法与C卡比较存在显著性差异(P<0.05)； A、B卡与C卡比较均存在显著性差异(χ2=22.371、χ2=38.893，P<0.05)；但A、B卡比较无显著性差异(P>0.05)。见表1。

表1 3种抗人球蛋白卡及试管法检测的阴、阳性频数及检出率(例)

注：1)与C卡及试管法比较P<0.05

2.2 3种试剂卡不同凝集强度的频数分布 C卡检测较多为阴性；对于弱阳性标本(0.5+～1+)，凝集强度A卡>B卡>C卡；对于强阳性标本(2+～3+)，凝集强度B卡>A卡>C卡。检测灵敏度B卡>A卡>C卡。见表2。

表2 3种试剂卡不同凝集强度的频数分布(例)

2.3 3种试剂卡不同凝集强度的频数对比 A、B卡检测效力相同，而C卡检测效果较弱。对于弱阳性标本，C卡较A、B卡大多检测不出，漏检率较高。3种卡检测病人标本得到相同凝集强度的概率均较低， A卡与B卡为41.2%、A卡与C卡为48.4%、B卡与C卡为30.9%，差异性明显。对于弱阳性标本，重合率A卡与B卡为33.9%、A卡与C卡为28.8%、B卡与C卡为6.9%；对于强阳性标本，重合率A卡与B卡为43.8%、A卡与C卡为64.5%、B卡与C卡为54.3%。见表3。

表3 3种试剂卡不同凝集强度的频数对比(例)

3 讨 论

微柱凝胶抗人球蛋白技术是一种改良抗人球蛋白试验方法，与传统试管法相比，简化了操作步骤，缩短了孵育时间。有研究比较微柱凝胶卡与传统方法对抗人球蛋白的筛选以及不规则抗体的检测，认为微柱凝胶法对抗体敏感性更高，甚至可以检测出传统方法不能检测出的抗体，更自动化、标准化。因此，微柱凝胶抗人球蛋白技术是一种简便、快速、灵敏、准确的试验方法[2]，且具有结果易于观察、反应稳定、易于保存、拍照长期保存等优点[3-4]。 微柱凝胶技术于1994年获得美国 FDA批准为免疫学检测技术，欧美等发达国家已经将微柱凝胶技术作为常规性的检测技术在临床广泛推广。目前，微柱凝胶技术在国内已较多运用于不规则抗体筛查、交叉配血及多种IgG类抗体的检测中。

现阶段，国内较多使用进口A、B卡，而较少使用国产C卡[5-7]。本研究以试管法作为参照进行比较，发现3种试剂卡的检出率有显著性差异，再进行组间两两比较后发现，A、B卡与试管法之间无显著性差异，而C卡检出率显著低于进口卡和试管法。

C卡对于进口卡检测为阳性的标本检出能力很低；在检测弱阳性的标本时，出现进口卡检测为弱阳性而C卡检测为阴性、A卡与C卡检测为弱阳性而B卡检测为强阳性的情况；在检测强阳性的标本时，出现进口卡检测为强阳性而C卡检测为弱阳性甚至阴性、C卡检测为强阳性而A卡检测为弱阳性的情况。3种试剂卡差异性较大。

综上所述， 检测灵敏度B卡>A卡>试管法>C卡，但容易出现假阳性结果，对于已考虑存在弱抗原反应的样本，首选灵敏度高的试剂卡鉴定，高效确保输血安全；而C卡阳性检测率和检测灵敏度最低，容易出现假阴性结果，漏检率较高，对输血的安全性造成隐患，但不能以此否认其在输血试验中的运用价值；推荐临床各实验室使用B卡对患者标本进行输血相容性检测，辅以A卡与C卡进行比较和排异，既达到安全输血的需要，又省时省力。不同厂家要建立共同的行业标准，实验室之间建立标准化操作程序，再经过长期大量临床研究，建立起微柱凝胶抗人球蛋白技术在检测上的“金标准”，让该技术在输血相容性检测中更准确、有效和安全。