老年急性心肌梗死患者血清miR-18a水平及意义

罗建华 王超 岳玉国

(浙江武警总队嘉兴医院心内科，浙江 嘉兴 314000)

急性心肌梗死(AMI)发生的病理基础为冠状动脉粥样硬化，冠状动脉粥样硬化引起的管腔狭窄、粥样斑块破裂及血栓形成造成心肌缺血缺氧性损伤。随着人口的老龄化，AMI的发生率升高，近年来介入治疗和溶栓治疗取得巨大进步，使患者在心肌发生梗死后可及时接受治疗，但多数患者治疗后会遗留不同程度的心功能损伤、心肌纤维化及心肌重构〔1〕。miRNA是一类非编码小RNA，广泛参与肿瘤形成、炎症反应、代谢、发育等多种病理生理过程，miRNA具有组织特异性，在循环中表达稳定，在AMI后的病理过程中发挥重要作用〔2〕。研究发现miR-18a在子宫肌瘤、恶性肿瘤等疾病中表达异常，参与肿瘤的发生发展〔3,4〕。本文对老年AMI患者血清miR-18a水平及其与心功能、心肌重构等的影响进行研究。

1 资料与方法

1.1临床资料 选择2016年1～12月浙江武警总队嘉兴医院心内科老年AMI患者90例作为AMI组，老年健康体检者90例作为对照组。AMI组年龄(76.52±4.26)岁，男48例，女42例；冠脉造影检查结果：单支血管病变41例，双支血管病变23例，3支血管病变26例；47例入院后成功接受经皮冠状动脉介入术(PCI)治疗。对照组年龄(75.81±4.32)岁，男46例，女44例，两组年龄、性别比较差异无统计学意义(P<0.05)。纳入标准：年龄70岁以上，AMI患者均为首次心肌梗死发作，均进行冠脉造影检查，健康体检者身体健康。所有患者签署知情同意书。排除恶性肿瘤者，肝肾等系统慢性疾病者。

1.2血液标本采集 采集AMI组入院时外周静脉血和对照组体检当天外周静脉血，进行PCI治疗患者同时采集PCI术后7 d外周静脉血。

1.3血清miR-18a水平测定 取外周静脉血5 ml，离心后分离血清，采用miRNA提取试剂盒(购自美国Qiagen公司)提取血清总RNA，采用反转录试剂盒(购自美国Qiagen公司)合成cDNA，根据miR-18a引物(上海生工生物科技有限公司设计合成)，上游引物：5'-TGTAGGGTAGGTTATGACA-3'，下游引物：5'-TTCGGACTGCCCCATAGACTA-3'进行PCR扩增(miR-18a检测试剂盒购自美国Qiagen公司)，以U6为内参，miR-18a水平以2-ΔΔCt表示。

1.4血清学指标水平测定 取外周静脉血5 ml，离心分离血清，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清心肌肌钙蛋白(cTn)T、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、生长分化因子(GDF)-15、转化生长因子(TGF)-β1水平(试剂盒购自美国Sigma公司)。

1.5心功能测定 所有受试者采用心脏超声心动图测定左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末容积(LVEDV)、左心室舒张末内径(LVEDD)等心功能指标。

1.6统计学方法 应用SPSS19.0软件进行t检验、相关性采用Pearson相关性分析。

2 结 果

2.1两组血清miR-18a、cTnT、CK-MB、GDF-15、TGF-β1水平比较 AMI组血清miR-18a、cTnT、CK-MB、GDF-15、TGF-β1水平显著高于对照组(P<0.001)。见表1。

2.2两组左心功能比较 AMI组LVEF显著低于对照组，LVEDV、LVEDD显著高于对照组(P<0.001)，见表2。

表1 两组血清miR-18a、cTnT、CK-MB、GDF-15、TGF-β1水平比较

表2 两组心功能比较

2.3不同血管病变支数AMI患者血清miR-18a水平比较 心肌梗死不同血管病变支数血清miR-18a水平比较，差异有统计学意义(F=93.429,P<0.05)，双支血管病变(1.91±0.14，n=30)和3支血管病变(2.35±0.17，n=30)患者血清miR-18a水平高于单支血管病变者(1.74±0.15,n=30)，3支血管病变患者血清miR-18a水平高于双支血管病变者(均P<0.05)。

2.4AMI患者PCI治疗前后血清miR-18a水平比较 90例AMI患者47例成功接受PCI治疗。47例PCI治疗前血清miR-18a水平(1.91±0.16)明显高于PCI治疗后(1.34±0.13，t=65.129,P<0.01)。

2.5AMI患者血清miR-18a与cTnT、CK-MB、GDF-15、TGF-β1水平相关性 AMI患者血清miR-18a水平与血清cTnT、CK-MB、GDF-15、TGF-β1水平呈正相关(r=0.536,0.610,0.562,0.593，均P<0.05)。

2.6AMI患者血清miR-18a与心功能的相关性 AMI患者血清miR-18a与LVEF呈负相关(r=-0.618，P<0.001)，与LVEDV(r=0.537,P<0.01)和LVEDD呈正相关(r=0.532,P<0.01)。

3 讨 论

AMI因冠状动脉斑块破裂或冠状动脉痉挛引起冠状动脉急性、持续性闭塞，从而引起心肌组织缺血缺氧性损伤；随着AMI治疗技术的不断提高，多数AMI患者可得到有效救治，但部分患者会出现心功能异常和心室的不良重构，从而增加心力衰竭的发生率，AMI后心室重构是导致梗死后心力衰竭的主要原因之一，因此预防和治疗心肌梗死后心室重构成为心血管研究的重点和热点问题〔5，6〕。

miRNA广泛存在于真核生物中，约有22个核苷酸组成的小分子RNA，通过抑制mRNA翻译调节基因转录后水平的表达，研究发现miRNA在心脏的发育及心血管疾病(心肌纤维化、心肌肥厚、动脉粥样硬化、心肌炎、高血压等)中发挥重要作用〔7，8〕。研究发现miR-18a在恶性肿瘤的发生发展、炎症反应等过程中具有重要意义〔9～11〕，关于miR-18a在心血管疾病中的研究不多。研究结果表明miR-18a可能参与老年AMI的发生发展过程。老年AMI病情进展过程中，心肌的缺血缺氧可引起心肌细胞损伤，心肌细胞损伤导致心肌细胞中多种结构蛋白、催化酶释放入血液循环，成为心肌损伤程度的标志物〔12〕。cTnT在细胞内钙离子调节横纹肌收缩的过程中发挥重要作用〔13〕；CK-MB在心肌细胞中高表达，并参与三磷酸腺苷生成和能量代谢的调节〔14〕。本研究表明老年AMI患者血清miR-18水平与血清cTnT、CK-MB水平呈正相关，表明血清miR-18水平升高可能促进老年AMI患者心肌细胞的损伤。

AMI患者心肌间质的纤维化和胶原合成、成纤维细胞增殖关系密切，GDF-15、TGF-β1为转化生长因子家族成员〔15〕，两者对心肌组织中成纤维细胞的增殖和活化具有重要的促进作用，可以加速纤维瘢痕的形成〔16，17〕。本研究结果显示老年AMI患者血清miR-18a水平与血清GDF-15、TGF-β1水平呈正相关，表明血清miR-18a水平的升高可能对老年AMI患者心肌纤维化过程具有促进作用。

心肌梗死后心肌重构机制复杂，心肌梗死后交感神经系统激活，水钠潴留，心肌细胞受到损失，心肌间质组织数量和心室肌细胞数量、排列方式等发生变化，肌浆网钙离子通道数目减少、活性降低，心肌收缩耦联发生变化，心肌顺应性和收缩性下降，心腔扩大，从而引起心室重构，造成LVEF减少，LVEDD和容积扩大〔18，19〕。本研究发现老年AMI患者血清miR-18a与左心室射血分数呈负相关，与左心室舒张末容积和左心室舒张末内径呈正相关，表明miR-18a参与老年心肌梗死后的心肌重构过程。

综上所述，老年急性心肌梗死患者血清miR-18a水平升高，miR-18a是潜在的老年急性心肌梗死的诊断、病情评估、疗效评估指标，miR-18可能参与老年急性心肌梗死的心肌损伤、心肌纤维化、心室重构过程。