抗人N端脑钠肽前体抗原表位分析及单克隆抗体的研制

侯亚璐，井金苗，魏治静，柳峰松，吴萌

1.河北大学 生命科学学院，河北 保定071002；2.河北省科学院，河北 石家庄050081

心力衰竭（心衰）是由于各种心脏结构和功能异常导致心脏收缩和（或）舒张功能受损的一组复杂综合征。当今我国老龄化严重，各种心脏疾病及心血管疾病不断增加，导致心衰的发病率极高，因而对于心衰的诊断和防治迫在眉睫[1]。由各种原因引起的心衰和心脏功能障碍可导致脑钠肽（brain natriuretic peptide，BNP）或人N端脑钠肽前体（N-terminal pro-BNP，NT-proBNP）增加[2-4]。2014 版《中国心力衰竭诊断和治疗指南》指出，BNP 或NT-proBNP 有助于预测心衰和术后动态监测（Ⅰ类，A 级推荐）。目前国际上与心衰相关的蛋白标志物应用最多的主要是BNP和NTproBNP，在危险分层方面体现得尤为突出[5]。相对于BNP，NT-proBNP的半衰期、体外稳定时间更长，灵敏度更高，不受标本采集条件的限制，更有利于心衰的诊断[6-8]。

目前，NT-proBNP的检测主要是免疫学方法，应用最广泛的是NT-proBNP 快速检测试剂盒，但所需抗体多为国外垄断，进口成本高，使得国内NT-proBNP检测产品价格居高。因此，研制特异性良好的抗NT-proBNP 单克隆抗体，对推动国内检测试剂的发展具有重要意义[9]。在此，我们采用2种方法预测NT-proBNP B细胞抗原表位，选出最合适的表位肽段，偶联得到免疫原，制备了特异性针对NT-proBNP 抗原表位的单克隆抗体，为研发NT-proBNP 快速检测试剂盒奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 材料

BALB/c 小鼠购自河北省实验动物中心；SP2/0骨髓瘤细胞由河北省科学院生物研究所细胞生化研究室保存；多肽合成由吉尔生化有限公司完成；NT-proBNP 重组蛋白购自广州万孚生物技术股份有限公司。……