α芋螺毒素MI分支肽的合成及免疫原性研究

陈荣芳，余硕，周良燚，张学荣，戴秋云

1.广西医科大学 蛇毒研究所，广西医科大学 基础医学院，广西 南宁530021；2.军事医学研究院 生物工程研究所，北京100071

α芋螺毒素MI 来自幻芋螺（Conus magus），其氨基酸序列为GRCCHPACGKNYSC-NH2[1]，含2 对二硫键（连接方式为Cys3-Cys8，Cys4-Cys14[2]）。MI 作用于肌肉型烟碱乙酰胆碱受体，对小鼠的半数致死剂量约10 μg/kg（腹腔注射）[2-4]，我们实测为15～20 μg/kg，是目前发现的毒性最强的芋螺毒素。MI 可导致中毒对象肌肉瘫痪及麻木，呼吸困难，心肌损害，心搏停止乃至死亡[1]。

目前MI 中毒无有效治疗药物，也未见MI的抗毒血清报道，仅见结构相似的α芋螺毒素GI 抗血清对MI的解毒效果报道[5]。GI与孔蓝蛋白或卵清蛋白偶联后免疫山羊，制备的抗血清对GI 及MI的保护活性不高[5]。本实验室开展了GI-BSA（牛血清蛋白）偶联物免疫后制备的小鼠抗血清工作，发现GI 抗血清对GI 中毒小鼠有一定的保护作用，但活性仍不高[6]。其原因可能是α芋螺毒素GI 通过戊二醛偶联蛋白载体时反应位点多，影响了GI的抗原表位，导致抗血清活性不高。

多抗原肽系统（multiple antigen peptide sys⁃tem，MAPs）由小的核心基质与围绕核心基质的高密度抗原肽形成，与常规的肽-载体蛋白相比抗原密度更高，免疫原性增强，已用于多肽抗体及疫苗的研发[7-8]。为制备MI 抗血清，我们采用点击反应制备了MI 多分支肽，保持MI 抗原表位的完整性，然后免疫小鼠，测定其抗体滴度与抗毒活性。结果表明，成功制备了MI 八分支抗原，但其免疫抗原性较低，抗血清的抗毒活性不佳。

1 材料与方法

1.1 材料

KM 小鼠（雌雄各半，18～20 g）及BALB/c 小鼠（雌性，5周龄，17～19 g）购自斯贝福（北京）生物技术有限公司）。……