降钙素基因相关肽受体单克隆抗体的制备与初步鉴定

王佳星，许永亮，付楚溪，张丹雨，薛冲，张惟材，王升厚，熊向华

1.沈阳师范大学 生命科学学院，辽宁 沈阳110034；2.军事科学院 军事医学研究院 生物工程研究所，北京100071；3.辽宁大学 生命科学学院，辽宁 沈阳110036

偏头痛是临床常见的慢性神经血管性疾病，于儿童和青春期开始发病，发病高峰期在25～50岁，患病率为5%～10%，且女性常高于男性[1]。多项研究证实，当偏头痛发作时体内降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）水平明显增高，且头痛强度与CGRP 水平呈正相关[2]。CGRP 通过与位于细胞膜上的CGRP 受体（CGRP receptor，CGRPR）结合激活环磷酸腺苷信号通路，因此，阻断CGRP与CGRPR的结合从而抑制CGRP 信号传导是治疗偏头痛的关键。目前CGRPR 被认为是偏头痛治疗和预防最具潜力的靶点，靶向结合CGRPR 阻断其与CGRP 结合的单克隆抗体可作为缓解偏头痛的候选药物[3-5]。

CGRPR 是G 蛋白偶联受体家族B 类成员，该家族是体内最大的膜蛋白受体家族，参与多种生理功能的调节，并且与很多疾病紧密相关，目前市场上近50%的药物都以G 蛋白偶联受体家族为作用靶点[6]。CGRPR 由1个N端胞外域、7 次跨膜结构域和1个C端胞内域组成，并与1个跨膜蛋白受体活性修饰蛋白（receptor activity modifying protein 1，RAMP1）和1个胞内蛋白（receptor com⁃ponent protein，RCP）组成功能性受体[7]。CGRP与CGRPR的N端胞外域结合后将信号传递至细胞内，因而本研究截取人源CGRPR的N端胞外域23～146 氨基酸残基区域作为筛选靶点，利用原核系统表达，经包涵体复性、纯化得到的CGRPR 胞外区蛋白作为抗原，通过杂交瘤技术筛选特异性结合CGRPR的单克隆抗体并进行分析测定。

1 材料与方法

1.1 材料

SPF 级BALB/c 雌鼠（北京维通利华实验动物技术有限公司）；……