大白猪OPN与FSH-β基因多态性对其繁殖性能的影响

孙义姗，黄 涛，孙敬礼*，胡九英，李梦寻，来红霞

(1.石河子大学动物科技学院,新疆 石河子 832000 ；2.新疆正大食品有限公司,新疆五家渠 831301）

中国是世界生猪养殖和消费的第一大国。猪的繁殖性状是受多种效应影响的低遗传力性状，利用常规育种方法很难有所突破。标记辅助选择法（Markerassisted Selection,MAS）对猪繁殖性状具有最高的选择效率，可以缩短世代间隔，提高育种的效率，是一种有应用前景的技术，运用该方法寻找繁殖性状的主效基因，对繁殖性状的遗传改良有着重要的意义[1]。

骨桥蛋白（osteopontin,OPN）基因是一种定位于猪的第8号染色体上的磷酸化糖蛋白，广泛分布于乳腺和胎盘等组织中，同时组成子宫-胎盘微环境，并全程参与生殖发育[2]。王旭平等[3]研究表明OPN基因可以对高乳脂率和高产奶量进行标记选择。此外，赖淑静[4]研究发现，OPN基因也可作为蛋品性状分子标记。学者Liaw等[5]研究发现，OPN基因可显著性提高新生大白猪存活率。

促卵泡素亚基（FSH-β）基因是由垂体前叶合成和分泌，是一个已被证实的影响猪产仔数的主效基因，其β亚基使FSH具有生物活性并具有一定特异性[6]。FSH在胎儿发育过程、妊娠维持和性别分化等方面发挥着重要作用[7]。在检测的五指山猪群体中只发现AA和AB两种基因型，可以通过选育增加等位基因频率以提高五指山猪的产仔数[8]。

OPN和FSH-β基因均为插入突变，所以只需采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术进行多态性检测，并分析候选基因多态性对大白母猪繁殖性状的影响，为分子育种提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

统计2014-2016年新疆正大食品有限公司1 011头初产、经产大白母猪6胎共3 735胎次的总产仔数、总活仔数、健仔数、死胎、木乃伊胎以及初生窝重等信息。采集1 011头大白猪耳组织样本，用试剂盒提取DNA。

1.2 主要仪器和试剂

1.2.1 主要仪器

无酶水，2hEsTaq MasterMix，组织基因组DNA抽提试剂盒，Marker DL2000，Marker 1，EB 染液，琼脂粉。

从上述数据分析可以看出，虽然学生意识到上课使用手机会影响学习，教师也会进行适当约束，但总体上，学生上课使用手机的情况是非常普遍的，严重影响到学生的学习效果[5]。

1.2.2 主要试剂

PCR仪、DYY-4稳流稳压电泳仪、凝胶电泳成像系统、微波炉、台式高速离心机。

1.3 试验方法

1.3.1 DNA的提取

用EXCEL对原始数据进行整理，同时计算多态信息含量（PIC）、有效等位基因数（NE）、基因频率、基因型频率、遗传杂合度（He）和遗传纯合度（Ho）。利用SAS（Version 9.1）软件分别对试验猪群两个候选基因的单基因型、合并基因型与繁殖性状进行相关分析，并进行哈迪-温伯格检验。

1.3.2 引物

从表2可知,OPN和FSH-β基因型频率均呈现出BB＞AB＞AA趋势，BB为优势基因型；等位基因频率B＞A，B为优势等位基因；OPN杂合度为0.50，FSH-β杂合度为0.42，有效等位数分别为1.99和1.73，PIC均处于0.25＜PIC＜0.5，说明此群体处于中度多态；卡方独立性检验结果表明OPN基因不符合哈迪-温伯格平衡，可能是人工选育的结果。而FSH-β基因符合哈迪-温伯格平衡。

1.3.3 PCR扩增

基于英语文学翻译可以看到，中西方文化在历史传统、生活习惯及思维方式等多个方面存在巨大差异，但是这些差异的存在，是社会发展的必然结果。而正视这些差异，也正是时代发展的必然要求。[10]我国文化要想在全球经济一体化发展过程中保持发展的优势，必须从这些差异入手，寻找到自己的特色与标识，争取在全球文化交流的过程中获得有利位置。

针对于治疗效果主要分为三个等级,当治疗后48h后大便性状正常,次数明显减少,其临床症状明显消失为显效;而治疗后48~72h内大便采恢复正常,临床症状消失则为显效;如果患儿治疗时间超过72h,临床症状以及大便均无明显变化则为无效[2]。

1.4 统计分析方法

提取按照TIANGEN基因组DNA提取试剂盒说明书进行。

2 结果与分析

2.1 等位基因频率、基因型频率以及遗传特性分析

设计的引物交给上海生工生物工程技术服务有限公司合成，引物序列如表1

李树化的这一首《如此温柔》在中国早期钢琴曲中是较为特别的一首，特别在于它的私密性内容和情感。这是他敬献给爱妻的一首“情歌”，既有西方浪漫主义情调，也兼有中国传统的“执子之手，与子偕老”的意愿。虽然是谱写在“圣诞节”期间，但是音乐并没有明显的宗教情绪，而是非常人性化和世俗化的表达。正是由于它的这个特点，所以李树化并没有将其公开发表，而是深深地收藏在自己的手稿中。西方浪漫主义音乐（尤其是钢琴音乐）中大都隐含着人类深沉而私密的情感，高尚的人文主义因素深蕴其中，这正是可贵之处。

WUDAPT 项目：城市形式与功能信息的众包解决方案及其应用 黄 媛 刘静怡 Jason Ching2018/04 26

PCR反应体系：去离子水6.2μL，2hEsTaq Master Mix7.5μL，上、下游引物各0.4μL，模板DNA 0.5μL，共15μL。OPN反应条件为：94℃变性5 min，35次循环（94℃，30 s；60℃，30 s；72℃，30 s）,72℃延伸10 min。FSH-β反应条件为：94℃变性5 min，35次循环（94℃，30 s；56℃，30 s；72℃，30 s），72℃延伸5 min。4℃保存60 min。分别用1.0%和1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。

2.2 基因效应分析

分析基因多态性与经产母猪总产仔数、总活仔数、健仔数、死胎、木乃伊胎以及初生窝重的相关性，结果见表5。经产母猪OPN基因AA型个体的总产仔数和健仔数显著高于AB型个体0.35头/胎和0.23头/胎（P＜0.05）；经产母猪FSH-β基因AB型的总产仔数显著高于BB型0.2头/胎（P＜0.05），此外，在初生窝重性状上AB基因型显著高于AA基因型0.54 kg/胎(P＜0.05)；合并基因型BBAA型在总产仔数、活仔数和健仔数三个性状上均显著高于ABAA基因型（P＜0.05）；在活仔数性状上，合并基因型AAAB型极显著高于BBBB型 0.42头 /胎 (P＜ 0.01)；在初生窝重性状上，BBAB型个体的极显著高于AAAA型和BBBB型(P＜0.01)，分别高出1.27 kg/胎和0.64 kg/胎。此外，BBAA型个体的初生窝重显著高于AAAA型1.26 kg/胎(P＜0.05)。由此可见，经产大白母猪合并基因型中BBAA，AAAB基因型为最优分子标记组合。

2.3 OPN和FSH-β单个基因型以及合并基因型对初产母猪繁殖性状的影响

利用SAS中的GLM模型分析基因多态性与大白猪繁殖性状的关系，结果见表4、表5。

分析发现初产母猪OPN基因及FSH-β基因的总产仔数、总活仔数、健仔数以及初生窝重的差异均不显著（P＞0.05）；OPN基因在木乃伊胎性状上AA基因型显著低于BB基因型0.13头/胎(P＜0.05)；FSH-β基因在死胎性状上BB基因型显著高于AB基因型0.13头/胎(P＜0.05)，而在初生窝重性状上BB基因型显著高于AB基因型0.57 kg/胎(P＜0.05)；初产母猪合并基因型中BBAA基因型比ABAA基因型的活仔数多1.68头/胎，健仔数多1.69头/胎；并且合并基因型中BBAA基因型的初生窝重极显著高于其他基因型(P＜0.01)；由此可见，初产大白母猪合并基因型中BBAA基因型为最优分子标记组合。

表2 OPN和FSH-β基因型频率及等位基因频率分布

表3 OPN和FSH-β的基因效应

2.4 OPN和FSH-β单个基因以及合并基因型对经产母猪繁殖性状的影响

由表3可得，OPN基因在初产母猪中表现出正的加性效应和显性效应，而在经产母猪中则相反；在FSH-β基因中，B等位基因在初产母猪中对NBA、THB有负效应，对TNB有正效应；A等位基因在初产及经产母猪中对TNB、NBA及NHB有正效应。对于TNB中的A和B等位基因效应，OPN基因的均为-0.08，FSH-β基因的均为0.003；根据孟德尔遗传定律发现，等位基因在同源染色体上的同一个位置,如果性状表现相同属于完全显性.即只要有显性基因就表现出显性性状，说明在初产大白猪中，OPN和FSH-β基因的等位基因在TNB中呈共显性。

表4 OPN和FSH-β不同基因型对初产母猪繁殖性状的影响

表5 OPN和FSH-β不同基因型对经产母猪繁殖性状的影响

3 讨论

研究以1 011头大白猪6胎共3 735胎次为试验群体，样本含量及分布符合统计学要求，中度多态（0.25＜PIC＜0.5），且两种基因均存在多态性。

无论是传统汉学阶段，还是新汉学阶段，长期以来，国内学界对海外中国研究成果翻译较多，系统梳理后的引进介绍并不多；批判较多，对其概念、理论与方法的借鉴与反思并不多。这正是受其研究视角的影响，毕竟多数学者对海外新汉学尤其是其中的政治研究表示质疑，而持审慎肯定态度的建构视角的学者并不多见。

3.1 OPN基因多态性对繁殖性能的影响

研究大白猪群中OPN基因B等位基因占优势且基因频率为0.54，这与Knoll等[9]、李千军等[10]、马力鹏等[11]、李不学等[12]和罗仍卓么等[13]研究结果一致。孙敬礼等研究发现B等位基因能提高猪的产仔数，呈现BB＞AB＞AA趋势[14]。但是本研究发现OPN基因与母猪繁殖性状呈正相关的为A等位基因。此外，OPN基因对繁殖性能影响在初产母猪各基因型均不显著，这与Korwin－Kossakowska等[15]和马力鹏等[11]研究结果一致，而在经产大白母猪OPN基因AA型个体的总产仔数和健仔数显著高于AB型个体0.35头/胎和0.23头/胎。在其余性状上，OPN基因的BB基因型木乃伊胎数显著高于AA基因型0.13头/胎。上述研究表明，对于OPN基因来说，优势基因为A等位基因。

3.2 FSH-β基因多态性对繁殖性能的影响

相关研究表明，FSH-β基因的B等位基因为优势基因，初产母猪FSH-β基因的AB基因型健仔数比AA型多1.21头/胎，经产母猪各基因型之间产仔数差异不显著[16]；在赵要风等[17]的研究中，杜洛克、大约克、长白等国外猪种中BB型为FSH-β的优良基因型；施启顺等[18]发现在大白猪中B等位基因频率较高，且AA基因型的总产仔数和产活仔数显著低于BB基因型。本研究所用大白猪群体，发现FSH-β基因的各基因型对初产母猪产仔数的提高无显著影响，这与李梦寻等[19-20]研究结果一致，分析可能是因为初产母猪生殖系统可能还没有发育完善。但在经产母猪中，FSH-β基因AB型的总产仔数显著高于BB型0.2头/胎，且在初生窝重性状上AB基因型显著高于AA基因型，以上结果分析比对发现单个基因FSH-β对母猪的繁殖性状的选择没有显著的意义。

3.3 合并基因多态性对繁殖性能的影响

OPN-FSHβ合并基因型对猪繁殖性状的影响还没有定论,合并基因型之间可能存在复杂的遗传互作效应，单个基因型的遗传效应要比合并基因型的遗传效应低[21]。刘乙等[22-23]研究结果显示，B为FSH-β基因的优势基因，在初产大白母猪中，ESR和FSH-β基因的优势合并基因型为ABAA，在经产大白母猪中，ESR和FSH-β基因的优势合并基因型为BBAA。本研究通过对比分析发现这一理论有一定依据，在初产大白猪群体中，OPN基因总产仔数BB基因型比AB基因型多产0.06头/胎,FSH-β基因的总产仔数AA基因型比AB基因型多0.03头/胎,而合并基因型的总产仔数BBAA型比ABAB型多0.66头/胎；并且同样在经产大白猪群体中，OPN基因总产仔数BB基因型比AB基因型多产0.06头/胎,FSH-β基因的总产仔数AA基因型比BB基因型多0.01头/胎,而合并基因型的总产仔数BBAA型比ABBB型多0.45头/胎。由此可见，OPN-FSHβ合并基因型中最优分子标记组合为BBAA。这提示，在种猪繁殖性状的选育过程中，应根据猪群特征有目的地选择多个影响繁殖性能的候选基因进行合并，并结合分子标记辅助育种方法来进一步有效地改善母猪的繁殖性状[24]。

除了事件本身，还可以通过其他细节让采访变得更加丰满。可以对采访对象所处的周边环境进行捕捉，给观众传递更多的信息；还可以依靠镜头语言，更好地展示采访对象的精神面貌，使观众提高对采访对象的认识，比如通过给采访对象的衣着、生活用品几个特写，观众就能够清楚知道采访对象的家庭等情况，提高观众的观看感受。

4 结论

本研究结果表明，在大白猪的群体中，OPN和FSH-β基因的优势基因均为B等位基因；OPN和FSH-β基因的正效应基因均为A等位基因；大白猪的合并基因型的总产仔数、活仔数、健仔数以及初生窝重的遗传效应高于单基因型；大白猪繁殖性状OPN-FSHβ合并基因型中最优分子标记组合为BBAA，可作为大白猪分子标记辅助选择的基础资料。