焦磷酸溴代醇诱导的γ9δ2T淋巴细胞对胃癌细胞株杀伤作用的实验研究①

夏 莉 齐 红 狄 娜 魏天雪 迟艳飞 牟正华 魏本杰 刘玉侠④

(吉林省人民医院，长春130021)

胃癌是世界第二大癌症死亡原因[1]。我国胃癌的发病率和死亡率均位居恶性肿瘤的第2位[2]。目前胃癌的治疗以传统手术和化疗为主，尽管胃癌综合治疗的疗效得以提高，但传统方法治疗胃癌已处于发展瓶颈期，而胃癌的遗传复杂性和异质性也很大程度上影响了经典靶向治疗的有效性[3，4]。所以开发新疗法成为亟待解决的问题。γ9δ2 T淋巴细胞(γ9δ2 T细胞)是近年来日益受到重视的T细胞亚群，具有很强的细胞毒功能，在机体抗肿瘤免疫中具有重要作用。本研究采用焦磷酸溴代醇(Bromohydrin pyrophosphate,BrHPP)联合白细胞介素2(IL-2)诱导γ9δ2 T细胞产生的方法，探讨γ9δ2 T细胞对胃癌的治疗作用。建立新的肿瘤生物治疗方法，为胃癌的治疗提供一种有效的免疫治疗方法和手段。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1仪器 生物倒置显微镜(Olympus，Japan)；低温低速离心机(SORVALL RTT，USA),全自动酶标仪(Labsystems Dragon),超净工作台(苏州净化设备厂),流式细胞仪(BD公司)。

1.1.2试剂 RPMI1640培养基：Gibco公司； BrHPP：法国Inserm研究所的Mary Poupot博士馈赠；IL-2：北京四环生物制药有限公司；高效离心管、淋巴细胞分离液：天津灏洋生物技术有限公司； MTT(噻唑蓝)、DMSO(二甲基亚砜)：Sigma公司；胎牛血清：天津康源生物技术有限公司；anti-human TCRγ/δ、Human TNF-α ELISA Kit、Human IL-2 ELISA Kit、Human IFN-γ ELISA Kit、FITC anti-human CD3：Biolegend公司；FITC Mouse Anti-human Vγ9TCR、PE Mouse Anti-human Vδ2 TCR：BD公司。

1.1.3瘤株 胃癌细胞株SGC-7901由吉林省肿瘤防治研究所提供。

1.2方法

1.2.1γ9δ2T细胞的制备及鉴定 取健康志愿者外周血40 ml，用TBD高效离心管分离单核细胞(PBMC)并计数，调细胞数为1×107ml-1,放入25 ml培养瓶内进行培养，共3瓶，每瓶10 ml。培养液为含有10%胎牛血清的RPMI1640，培养2 h后，向培养瓶内加入以下物质：第1瓶加入IL-2 1 000 U/ml；……