白癜风患者血清中IL-33和TNF-α水平的研究

王迪 苗青 王萍

[摘要]目的：检测白癜风患者血清白介素-33（IL-33）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，探讨IL-33和TNF-α水平与白癜风发生、发展之间的关系。方法：采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验分别对41例白癜风患者及35例健康志愿者血清IL-33和TNF-α的水平进行检测，比较不同分期白癜风患者与正常对照组血清中IL-33和TNF-α水平。结果：白癜风组血清IL-33、TNF-α水平较健康对照组升高，差异具有统计学意义（P<0.05）;进展期、稳定期白癜风患者血清IL-33、TNF-α水平高于健康对照组，且进展期高于稳定期，差异有统计学意义（P<0.05）;白癜风患者血清IL-33和TNF-α水平之间存在正相关性（r=0.904，P<0.05）。结论：IL-33和TNF-α均作为促炎性因子参与了白癜风的发生、发展，血清水平可反映疾病进展情况。

[关键词]白癜风;白细胞介素-33;肿瘤坏死因子-α;免疫;相关性

[中图分类号]R758.4+1   [文献标志码]A    [文章编号]1008-6455（2019）02-0091-03

Abstract： Objective  To evaluate the serum levels of IL-33 and TNF-α in patients with vitiligo，and to explore the relationship between IL-33 and TNF-α levels and the development of vitiligo. Methods  The concentrations of IL-33 and TNF-α in serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） in 41 patients with vitiligo and 35 healthy volunteers. The concentrations of IL-33 and TNF-α in the serum of patients with different stages of vitiligo and normal control were compared. Results  The levels of IL-33 and TNF-α in the serum of patients with vitiligo were higher than those in the healthy control group. The difference was statistically significant （P<0.05）.The levels of serum IL-33 and TNF-α in the advanced and stable phases were higher than those in the healthy control group， and the progression was higher than the stable phase. The difference was statistically significant. （P<0.05）.There was a positive correlation between the expression level of IL-33 and TNF-α（r=0.904，P<0.05）. Conclusion  Vitiligo patients serum IL-33 and TNF-α are all proinflammatory factors involved in the pathogenesis of vitiligo， and serum levels can reflect disease progression.

Key words： vitiligo; interleukin-33; tumor necrosis factor-α; immunity; correlation

白癜风是常见的皮肤科疾病之一，发病机制尚不明确，其中自身免疫学说备受学者们关注。近几年研究发现IL-33、TNF-α可能参与了白癜风的发病过程。IL-33参与多种自身免疫性疾病，银屑病患者皮损中IL-33表达增高，能增强肽类物质P对肥大细胞释放血管内皮生长因子的影响，从而增加血管通透性，促进炎症反应[1]。TNF-α水平增高可抑制黑素细胞的增殖进而导致白癜风的发生。目前关于IL-33在白癜风患者血清中的研究较少，而较多研究提示TNF-α作为促炎因子可抑制黑素细胞的增殖，从而在白癜风发生发展中发挥作用。笔者对41例白癜风患者及35例正常对照组血清中IL-33、TNF-α水平进行检测，研究IL-33和TNF-α水平相关性及不同时期表达情况，并观察其在白癜风发病过程中的作用，现报道如下。

1  资料和方法

1.1 一般资料：选取2017年1月-2017年11月于笔者科室就诊的白癜风患者41例，根据病史、体格检查及Wood灯确诊为白癜风。其中男23例，女18例;年龄3～54岁，平均（23.7±12.9）岁;病程1月～20年，平均22.3个月。按《白癜风诊疗共识（2014版）》進行分期[2]，其中进展期23例，稳定期18例。入选标准：具备中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会色素病学组制定的“白癜风的诊疗标准（2010年版）[3]”中描述的白癜风典型临床表现：①后天发生的形状不规则的脱色性白斑、界限清、边缘色素正常或加深;②可发生于任何皮肤、黏膜部位，可继发于外伤后，皮损内毛发也可变白;③排除白色糠疹、炎症后色素减退斑、无色素痣、贫血痣、特发性色素减退斑、斑驳病等其他皮肤病;④所有入选患者的Woods灯检查呈亮白色荧光。另选取健康志愿者35例为正常对照组，其中男21例，女14例;年龄13～48岁，平均（27.4±9.83）岁。两组患者性别、年龄差异无统计学意义，具有可比性。两组入选对象均未合并其他免疫性疾病，无外用或系统使用过影响色素生成的药物，未服用过糖皮质激素或免疫抑制剂等影响免疫功能的药物。研究经本院伦理委员会批准，所有患者均知情并签署知情同意书。

1.2 主要试剂及仪器设备：人IL-33/TNF-α定量酶联免疫分析试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技有限公司）。酶标仪（美国Thermo scientific公司）。

1.3 检测方法：两组患者均在清晨空腹状态下抽取肘部静脉血3～5ml，室温放置2h后，在2 500rpm/min的速度下离心20min，采用精密移液器分离出相应上层血清，装入EP管内，编码标记后放置于-80℃的冰箱保存待测。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）测量两组患者血清中IL-33及TNF-α水平。实验步骤严格按照定量酶联免疫分析试剂盒使用说明操作，用酶标仪在450nm波长处测量吸光度值，通过绘制标准曲线计算样品中IL-33及TNF-α的浓度。

1.4 统计学分析：采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析。计量资料以（x?±s）表示，分类变量以百分比表示。计量资料两组间比较采用t检验，多组间均数比较采用单因素方差分析，χ2检验用于分类变量之间的比较，Pearson相关分析用于正态分布资料。检验水准设为0.05，P<0.05表示差异有统计学意义。

2  结果

2.1 两组患者血清IL-33、TNF-α水平比较：白癜风组患者血清IL-33及TNF-α水平较健康对照组明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 不同分期白癜风组与对照组患者血清IL-33、TNF-α水平比较：采用单因素方差分析后用LSD-t法比较进展期、稳定期及健康对照组两两之间血清IL-33、TNF-α水平，发现进展期组血清IL-33及TNF-α的水平高于稳定期，且稳定期高于健康对照组，差异均具有统计学意义（P<0.05）。见表2，3。

2.3 白癜风患者血清中IL-33与TNF-α的相关性比较：通过Pearson相关分析对白癜风患者血清中IL-33、TNF-α的水平进行比较，发现IL-33和TNF-α水平之间存在正相关性（r=0.904，P<0.05）。

3  讨论

白癜风是临床上常见的色素脱失性皮肤病，主要表现为境界清楚的色素脱失斑，其发病机制尚未明确，可能与遗传易感性、神经因素、氧化应激、黑素细胞的流失等有关[4]。现在研究最受认可的是自身免疫机制，自身免疫功能的紊乱可导致黑色素细胞的破坏或凋亡，进而引起白癜风。IL-33是近几年发现的促炎因子，主要表达于上皮细胞及内皮细胞[5]，在细胞损伤后释放。IL-33属于IL-1细胞因子家族，是一种具有双重功能的细胞因子，它可以作为细胞内核因子抑制转录调节，也可作为传统的细胞因子与受体转硫酶同系物2（ST2）结合，参与促炎症反应[6]。最新研究还发现IL-33具有“警报”功能，可快速激活先天性免疫途径，特别是Th2细胞的免疫反应，说明IL-33在炎症、感染和自身免疫性疾病中起到了重要作用[7]。近年来IL-33被发现参与了多种自身免疫性疾病，如银屑病、系统性红斑狼疮、系统性硬化症等[8]。Vaccaro[9]等研究表明IL-33是一种炎症因子，可激活中性粒细胞、肥大细胞及角质形成细胞，在白癜风患者血清中IL-33水平较健康对照组增加。Zhou J[10]等人的研究也发现IL-33可直接调节表皮黑素细胞功能。本研究发现白癜风组患者血清中IL-33水平高于健康对照组，并且在进展期组、稳定期组、健康对照组中依次降低，提示IL-33作为人体体内的炎症因子参与疾病的发生、发展。进展期白癜风患者血清IL-33水平比稳定期高，说明IL-33的水平可提示疾病的活动程度，稳定期白癜风患者IL-33水平高于健康对照组，提示稳定期白癜风患者血清中仍然存在免疫紊乱。

TNF-α也是一种促炎性的细胞因子，通过激活受体介导的凋亡途径在细胞凋亡中起重要作用[11]。它由许多不同类型细胞产生，包括活化的T细胞，成纤维细胞，脂肪细胞，平滑肌细胞和角质形成细胞。角质形成细胞合成细胞因子，如TNF-α、IL-1α、IL-6和转化生长因子-β（TGF-β），它们是人类黑素细胞增殖和黑素生成的旁分泌抑制剂。TNF-α还影响黑素细胞的凋亡途径，其水平在白癜风的发病机制中可能起重要作用[12]。Moretti S及Sushama S等报道了白癜风患者表皮中TNF-α的增加使角质形成细胞凋亡，导致黑素细胞的消失[13-14]，而尚智伟等也发现白癜风患者血清中TNF-α的增加抑制黑素细胞的增殖，降低了酪氨酸酶的活性[15]，Li P等[16]研究发现TNF-α是黑色素细胞旁分泌抑制因子，并且与疾病的发生密切相关，本研究发现白癜风患者组血清中TNF-α的浓度水平高于健康对照组，且进展期高于稳定期，提示TNF-α也参与了白癜风发病的免疫调控。Li P等研究表明角质形成细胞来源的IL-33可以结合角质形成细胞或内皮细胞上的ST2，并刺激TNF-α的产生，导致色素沉着的丧失或黑素细胞的丧失。猜测TNF-α同时也可刺激IL-33分泌，这种正反馈回路可能参与白癜风的发病机制。本研究发现白癜风患者血清中IL-33和TNF-α水平呈正相關，说明IL-33和TNF-α在白癜风发病过程中有一定的联系或存在相互调控的可能，共同参与白癜风的发生、发展。

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