油茶根腐病致病菌分离·检测与防治药剂的筛选

马英玲，罗丽蝉

(1.广西生态工程职业技术学院，广西柳州 545004；2.广西高峰林场，广西南宁 545004)

油茶(Camelliaoleifer)是世界四大木本油料之一，其所产的茶籽油不饱和脂肪酸含量达90%以上，不含对人体有害的芥酸，能降低血清胆固醇含量，可预防高血压和常见的心血管疾病，具有很好的保健作用，被人们称为长寿油。2009年10月，广西区政府出台了《广西壮族自治区人民政府办公厅关于加快油茶产业发展的意见》，提出了广西油茶产业发展的目标[1]。随着油茶种植面积的不断增加，油茶病虫害发生越来越多[2]。油茶根腐病是近年来危害油茶的一种毁灭性病害。为了有效抑制该病害的发生和蔓延，笔者对油茶根腐病致病菌的分离、检测与防治药剂的筛选进行了研究。

1 材料与方法

1.1油茶根腐病病原菌分离

1.1.1试验材料。油茶根腐病病株采自广西柳州、南宁的油茶林地。

1.1.2试验方法。洗净供试油茶病根，以75%乙醇擦涂表面，并用灭菌解剖刀将油茶组织切成约4 mm2的小方块(取病健组织)；将小方块依次放入75%乙醇约50 s、0.1%升汞1 min，无菌水冲洗3次，每次浸泡时间2 min，然后移置于PDA培养基(马铃薯)上。将其放置25 ℃恒温箱中培养5 d，长出菌丝后，挑取尖端菌丝进行纯化培养[3]。

1.2油茶根腐病病原菌致病性检测[4](人工诱发试验)

1.2.1试验材料。人工诱发试验接种用的菌株，均分离自自然感病的病变组织获得的纯菌株，供试寄主为当年油茶嫁接苗。

1.2.2试验方法。以有伤和无伤2种方法进行人工接种，用菌丝体和病原菌的孢子悬浮液分别对健康供试油茶植株进行刺伤接种和非刺伤接种2种方法[5]。有伤接种是用灭菌的大头针，在健康油茶植株根茎消过毒的接种处扎几个小孔，然后取直径5 mm的菌种反贴于植株表面；或用灭菌的蒸馏水将菌种制成孢子悬浮液，将分生孢子悬浮液接种于植株接种处。无伤接种是在健康油茶植株根茎消过毒的接种处，将直径5 mm的菌丝块反贴于表面；或将分生孢子悬浮液接种于植株接种处，接种处表面未被刺伤。2组试验均分别以不带菌的培养基和无菌水做对照试验。定期观察发病情况，并记录。

1.3油茶根腐病田间防治试验

1.3.1试验材料。供试药剂：50%完美WP，石家庄市绿丰化工有限公司生产；50%退菌特，天津市兴果农药厂生产；70%白色甲托(甲硫福美双)WP，陕西汤普森生物科技有限公司生产。

1.3.2试验方法。试验地点设在油茶根腐病发生的广西柳州油茶育苗场。试验在病害发生初期的5月进行。每种药剂设3个重复，每个重复处理250株苗木，设12个试验小区，小区面积约1 m2。在每个小区内，随机选择供试药剂，对油茶嫁接苗淋药处理，7 d后再淋1次药，对照用清水处理，重复3次，药效检查时间在最后一次喷药后10 d进行。并根据病级统计病情指数[6]和防治效果。发病分级标准[5]见表1。

表1 油茶根腐病发病分级标准

2 结果与分析

2.1油茶根腐病致病菌分离结果共分离15个样本，分离到镰孢属(Fusarium)真菌纯菌株15株，在PDA培养基上培养6 d的菌落见图1。PDA培养基上长满气生菌丝，白色棉絮状，菌落圆形，菌落底部培养基初期不变色，后期变色。挑取适量菌丝在显微镜下镜检，其病原菌特征见图2。菌丝体有格分枝，病原菌产生大小2种孢子，大型孢子长椭圆形或椭圆形，有3～5个隔膜，稍弯曲，向两端渐细；小型分生孢子椭圆形或腊肠型，少数稍弯曲，1～2个隔膜或无隔膜。

图1 病原菌在PDA上的菌落形态Fig.1 Colony morphology of pathogens on PDA

图2 显微镜下的病原菌特征Fig.2 Microscopic characteristics of pathogens under microscope

2.2油茶根腐病原菌致病性检测结果以有伤和无伤2种方法进行人工接种，第3、6、9、12天分别记录发病情况，结果见表2、图3～6。

从接种诱发的病苗中，取离接种点有一定距离的病组织分离培养[7]，获得镰孢属(Fusarium)真菌纯菌株，在显微镜下观察大小2种孢子，大型孢子长椭圆形或椭圆形，有3～5个隔膜，稍弯曲，向两端渐细；小型分生孢子椭圆形或腊肠型，少数稍弯曲，1～2个隔膜或无隔膜。镰孢属(Fusarium)真菌是油茶根腐病的主要致病菌(图7)。

表2 油茶根腐病诱发试验

图3 接种第3天部分油茶幼苗 Fig.3 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 3 days

图4 接种第6天部分油茶幼苗Fig.4 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 6 days

图5 接种第9天部分油茶幼苗Fig.5 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 9 days

图6 接种第12天部分油茶幼苗Fig.6 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 12 days

图7 油茶根腐病诱发试验再分离培养的病原菌Fig.7 Isolation and cultivation of pathogenic bacteria from root rot of Camellia oleifera

2.3油茶根腐病田间防治结果在室内药剂抑菌试验[8]中，选取3种对油茶根腐病菌抑菌效果较好的药剂，进行田间防治试验，结果表明，70%白色甲托WP防治效果可达79.3%，其次是50%完美WP，防治效果为68.8%，防治效果较差的是50%退菌特WP，其防治效果为56.7%(表3)。

为检验不同药剂田间对油茶根腐病的防治效果差异性，将试验数据录入SPSS软件进行药剂与防治效果的Spearman相关分析和药剂对防治效果的单因素方差分析，结果表明，F=55.158，Sig.=0.000<0.01，表明这3种药剂在田间的防治效果差异极显著。

表3油茶根腐病田间防治试验病情指数

Table3DiseaseindexofrootrotofCamelliaoleiferainfieldcontrolexperiment

药剂Drug施药前病情指数Disease indexbefore application第3次淋药10 d后10 days after the third drenching病情指数Disease index平均防治效果Average control effect∥%50%完美800倍液50% Wanmei 800 times liquid25.817.868.870%白色甲托800倍液70% white methyl tobuzin 800 times liquid26.211.979.350%退菌特 800倍液50% bacteri-ostatic 800 times liquid24.724.8 56.7清水对照Water control25.457.3—

3 结论与讨论

油茶根腐病在广西从4月开始发病，7、8月为病发高峰期。感病油茶当年抽出的春梢和秋梢减少，叶片慢慢褪绿、无光泽，后期叶片枯黄并大量脱落，树冠稀疏，花蕾量减少，7—8 月是重病树的死亡期。通过病原菌的组织分离和人工诱发试验，结果表明，油茶根腐病的致病菌为镰孢属(Fusarium)真菌，该病菌是土壤习居菌，腐生为主，致病力强[9]。侵入寄主后，潜育期短，短期内病害发生严重且传染速度快。通过用多种杀菌剂对致病菌进行室内毒力抑菌试验，选择抑菌效果较好的3种药剂进行田间防治试验，结果表明，75%白色甲托的田间防治效果最好，防治效果达79.3%；其次为50%完美WP，防治效果为68.8%；最后是50%退菌特WP，防治效果为56.7%。这些药剂在市场上易买到，可在生产上推广应用。