敲减FGFR1基因表达对婴幼儿血管瘤内皮细胞生物学特性的影响*

徐 南，徐 杰，李 函，钱丽娟，李忠堂

(1东南大学附属中大医院无锡分院儿科， 江苏 无锡 214011； 2东南大学附属中大医院儿科， 江苏 南京 210009)

血管瘤是一种常发生于婴幼儿的良性肿瘤，主要的病理表现为血管的恶性形成，生物学特点表现为血管瘤内皮细胞(hemangioma endothelial cells, HemECs)的异常增生，具有明显的增生期和退化期[1-2]。虽然部分血管瘤可自行消退，但仍有部分血管瘤未退化并可进行可持续生长；一些血管瘤生长部位特殊，可引起毁容和破溃等，具有一定的危险性并影响局部器官功能。目前血管瘤的临床治疗具有多种治疗方法，但对于血管瘤的生长分子机制尚不清楚。研究表明，在血管瘤快速增生期，可能由于HemECs内部分基因的突变，从而激活相应的信号通路，从而促进HemECs大量快速生长和增殖，而血管瘤消退的主要原因是HemECs的凋亡增加和分化、转移[3-5]。成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1，FGFR1)在血管生长过程中发挥重要作用[6]。 因此，本文通过RNA干扰技术敲减体外培养的HemECs细胞中FGFR1基因的表达，分析其表达量对HemECs细胞生物学特点的影响，为理解婴幼儿血管瘤的病程形成机制提供实验基础。

材 料 和 方 法

1 主要实验材料

EGM-2MV培养基购自Lonza；小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)、Lipofectamine 2000和TRIzol购自Sigma；反转录试剂盒、荧光定量PCR(qPCR)试剂盒、细胞凋亡检测试剂盒和RIPA细胞裂解液购自上海碧云天生物研究所；Cell Counting Kit-8(CCK-8)购自日本同仁公司；Transwell小室购自Corning；Matrigel购自BD；抗磷脂酰肌醇3-激酶(phospoinositide 3-kinase，PI3K)单克隆抗体、抗蛋白激酶B(protein kinase B，AKT)单克隆抗体、抗磷酸化AKT(p-AKT)单克隆抗体和抗GAPDH单克隆抗体购自Cellular Signaling Technology；辣根过氧化物酶标记的II 抗购自武汉博士德有限公司。……