VEGF基因转染脂肪干细胞后上清液对皮肤成纤维细胞及脐静脉血管内皮细胞的影响*

李江璇，肖丽玲，李升红，刘宏伟，潘潇寒，张碧雅

(暨南大学附属第一医院整形外科， 广东 广州 510632)

脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)是一类具有多向分化潜能的细胞，被证实可分化为脂肪细胞、骨细胞、神经细胞、心肌细胞和上皮细胞等[1]，将其直接注射于损伤部位周围可修复疾病所致受损细胞，如将脂肪干细胞输入门脉系统治疗肝脏疾病[2]。然而将人ADSCs(human ADSCs, HADSCs)直接应用于人体可能存在一些风险，包括其分化方向和生长调控的不确定性等，因此HADSCs上清液(HADSCs-conditioned medium， HADSCs-CM)的修复作用被发现。现已知ADSCs可分泌包括血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)[3]、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)[4]、转化生长因子和血管生成素[5]等生长因子，曾有实验表明其上清液可促进成纤维细胞[6]和内皮细胞[5]等的生长进而促进创面愈合，因此，我们试图通过提高HADSCs的分泌功能并用其上清液培养细胞，观察其对创面相关细胞的影响。

本研究通过慢病毒转染VEGF165基因于HADSCs，并收集HADSCs-CM，观察其对人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts，HDFs)及人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)增殖及迁移的作用，为其在创面愈合方面提供参考资料。

材 料 和 方 法

1 主要试剂与仪器

胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、DMEM培养液和PBS溶液(HyClone)；ECM培养液(ScienCell)；人CD29-PE、CD90-PE、CD45-FITC和CD106-FITC 单克隆抗体(BD)；Ⅰ型胶原酶(Sigma)；人脂肪干细胞成骨、成脂和成软骨诱导液(Cyagen)；青霉素-链霉素液(灏洋公司)；胰蛋白酶和中性蛋白酶(Gibco)；免疫组化试剂盒(中杉金桥公司)；VEGF ELISA试剂盒(联科生物公司)；bFGF ELISA试剂盒(Bio Swamp)；靶向VEGF165慢病毒(吉凯公司)。

CO2培养箱和细胞超净工作台(Esco)；倒置显微镜(Olympus)；低速离心机(中佳公司)；培养板(康宁公司)；CCK-8试剂盒(和元公司)；……