JMJD1A促进胶质瘤增殖侵袭的分子机制探究

刘坤 许惠娟 管瑛瑛 陈桓 张福汉 宿杰阿克苏 侯英勇 许建芳

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的一种恶性肿瘤，具有高侵袭性、高复发率和高死亡率等特点[1-3]。尽管研究者在胶质瘤恶性进展方面开展了大量研究，目前临床仍然没有有效的治疗和早期诊断策略。据报道，JMJD1A的表观遗传调控在精子发生、新陈代谢、性别决定、干细胞自我更新和分化等生物过程中起着不同的作用[6-12]。目前，JMJD1A已经被发现在多种肿瘤中发挥重要作用，但是在胶质瘤中还未见报道。本文旨在进一步了解JMJD1A在胶质瘤增殖侵袭过程中的作用，期望为胶质瘤的诊断治疗提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 脑胶质瘤标本收集

收集2016年1—12月复旦中山医院手术切除并经病理科确诊为脑胶质瘤的10例临床组织标本。

1.2 Western Blot实验

配制12%分离胶与4%浓缩胶，SDS PAGE电泳1.5小时，电流为浓缩胶25 mA，分离胶30 mA。转膜，脱脂奶粉封闭，一抗4℃过夜，二抗37℃孵育1小时，暗室内曝光显影。

1.3 细胞株及主要试剂

胶质瘤细胞株购于中科院上海细胞生物所；Western-blot抗体购于CST公司；MTS试剂盒购于Promega公司；Transwell试剂盒购于Millipore公司；siRNA购于上海吉凯公司。

1.4 细胞株培养

人胶质瘤细胞系U87和U251用10%的胎牛血清DMEM培养基进行培养，并加入青霉素（100 U/mL）和链霉素（100 mg/L），置于37℃ 5%的CO2培养箱内培养。

1.5 细胞转染

细胞汇合度至70%～90%时，用DharmaFECT进行细胞转染。实验为3组，未处理组细胞（Mock）加入培养基，阴性对照组（siC）加入无意义序列，JMJD1A干扰组（siJMJD1A）加入JMJD1A特异性干扰序列siRNA。

1.6 MTS增殖实验

每隔24小时，每孔加入20ulMTS试剂37°C培养箱继续培养4 h，最后在490 nm波长进行吸光度检测。……