西罗莫司通过MAPK信号通路抑制人宫颈癌细胞增殖的实验研究

贾利刚，褚兆苹，田 菲，韩 华，代聪伟，王 蓓，张 媛

(河北省人民医院妇科,石家庄 050051)

宫颈癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，虽然近年来随着宫颈细胞学筛查技术的不断提高，发病率及病死率有所降低，但患者呈年轻化趋势[1-3]。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族是一类与细胞增殖、凋亡、分化、应激反应等密切相关的丝氨酸/苏氨酸激酶，主要包括细胞外信号调节激酶(ERK)，p38 MAPK，c-Jun氨基末端激酶(JNK)3个亚族[4-6]。研究显示MAPK信号通路在众多实体肿瘤中被高度激活，抑制此信号通路的活化成为多种抗肿瘤药物的靶点之一[4-6]。西罗莫司是从复活岛上发现的一种大环内酯类抗生素，动物药理实验发现西罗莫司是一种低毒、高效、无肾毒性的新型免疫性抑制剂，被广泛地应用于肾移植中[7-8]。另外研究还显示西罗莫司能够通过抑制其靶蛋白mTOR表达进而调控下游基因转录，发挥对卵巢癌、乳腺癌、肝癌、肾癌、宫颈癌等肿瘤细胞的杀伤作用[9-13]，而西罗莫司是否能够通过抑制MAPK信号通路进而发挥其抗肿瘤作用尚未见报道，因此本研究将旨在探讨西罗莫司能否通过MAPK信号通路抑制宫颈癌Hela细胞的增殖。

1 材料与方法

1.1细胞株 宫颈癌细胞Hela购自中国科学院细胞库，培养于含有15%胎牛血清的DMEM培养基中，在37 ℃，5% CO2条件下培养。

1.2试剂与仪器 DMEM培养基、胎牛血清均购自美国Gibco公司；兔抗人Bax、Bcl-2、Cyclin D1、p21、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK及GAPDH多克隆抗体均购于美国Abcam公司；Annexin V-FITC/PI流式双染试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒，细胞周期检测试剂盒、SB203580(ERK1/2抑制剂)、SP600125(JNK抑制剂)、PD98059(p38 MAPK抑制剂)均购于南通碧云天生物技术有限公司。……