两种葡萄孢属真菌对不同品种百合花瓣和叶片的侵染能力比较

刘旭燕，李葵秀，段连洁，刘冠泽

(云南农业大学植物保护学院，云南 昆明 650201)

灰霉病是世界性重要经济作物病害，主要由葡萄孢属Botrytis真菌引起，灰葡萄孢Botrytis cinerea是本属模式种[1]。灰葡萄孢寄主范围极其广泛，预测该菌可以寄生几乎所有双子叶植物[2]。百合是世界上最受欢迎的鲜切花之一[3]，在世界鲜切花贸易中具有重要地位，云南省是重要的百合种植基地。百合灰霉病是危害百合生产的重要病害之一[4—5]，主要由椭圆葡萄孢Botrytis elliptica和灰葡萄孢侵染致病。研究表明，百合不同品种对灰霉病抗性不同，大部分研究都是以孢子悬浮液或者菌丝块接种百合叶片的方法来探究百合品种的抗病性[6—7]。作者认为花瓣是病原菌侵染百合的重要部位，感病花瓣是影响百合鲜切花销售的重要因素之一。尤其在云南省7～8月雨水充沛季节，孢子可借助雨水落到花瓣上引起病害。因此，本研究采用菌丝块室内离体接种法比较椭圆葡萄孢和灰葡萄孢对不同品种百合花瓣和叶片的侵染能力，为百合灰霉病田间控制提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

椭圆葡萄孢Botrytis elliptica和灰葡萄孢Botrytis cinerea均由华中农业大学李国庆教授课题组提供。

1.2 供试品种

百合品种 ‘索邦’(‘Sorbonne’)、‘木门’、‘萨曼莎’、‘卡罗琳’，购自昆明市斗南花卉市场。

1.3 接种方法

百合盛花期每个品种选5株，每株选成熟叶片5片，选当天完全开花花朵3朵。用直径0.5 cm打孔器分别在PDA培养基上培养3 d的灰葡萄孢和椭圆葡萄孢边缘取菌丝块。每个叶片和花瓣分别接种1块菌丝块，接种后将叶片和花瓣置于搪瓷盘中，20 ℃下保湿培养，每隔24 h观察病斑出现情况并记录病斑大小。

1.4 调查方法

叶片或花瓣接种菌丝块后，变色或者褐色斑点出现时间即为发病时间，每隔24 h测量病斑直径，灰葡萄孢侵染叶片病斑扩展速度为72 h病斑直径除以3 d；灰葡萄孢侵染花瓣发病时间较短，病斑扩展速度为48 h病斑直径除以2 d。椭圆葡萄孢接种‘木门’叶片，观察96 h，依然没有发现任何病斑，因此病斑扩展速度为0，椭圆葡萄孢侵染‘索邦’叶片72 h才出现病斑，因此病斑扩展速度为96 h病斑直径除以4 d，其余计算方法同灰葡萄孢侵染叶片；椭圆葡萄孢侵染‘萨曼莎’花瓣72 h才出现病斑，病斑扩展速度为96 h病斑直径除以4 d，其余计算方法同灰葡萄孢侵染花瓣。

2 结果与分析

2.1 两种葡萄孢对不同品种百合叶片侵染能力比较

4个百合品种离体叶片接种两种病原菌后发病情况见表1。4个百合品种离体叶片接种灰葡萄孢后病斑出现时间无差异，均在接种48 h后出现变色或斑点。接种椭圆葡萄孢的4个百合品种叶片病斑出现时间差异显著，‘萨曼莎’和‘卡罗琳’最早出现病斑，均在接种48 h后出现病斑，与接种灰葡萄孢的离体叶片病斑出现时间一致；‘索邦’则在接种72 h后出现病斑；而‘木门’在接种96 h后依然没有病斑出现。病斑扩展速度比较分析，灰葡萄孢侵染不同品种百合叶片病斑扩展速度差异不显著，约为0.15 cm·d-1；椭圆葡萄孢侵染不同品种百合叶片病斑扩展速度差异显著，‘木门’无病斑出现，出现病斑最早的‘卡罗琳’病斑扩展速度与‘索邦’差异显著。

2.2 两种葡萄孢对不同品种百合花瓣侵染能力比较

从表1得知，‘木门’、‘萨曼莎’、‘卡罗琳’离体花瓣在接种灰葡萄孢24 h后有病斑出现，‘索邦’离体花瓣病斑出现时间比前3个品种晚12 h，从病斑扩展速度来看百合品种之间差异显著。不同品种百合离体花瓣接种椭圆葡萄孢病斑出现时间差异明显，‘卡罗琳’离体花瓣接种椭圆葡萄孢与接种灰葡萄孢病斑出现时间一致，均在 24 h有病斑出现，病斑扩展速度最快，但是接种灰葡萄孢病斑扩展速度为1.40 cm·d-1，明显高于接种椭圆葡萄孢；‘木门’、‘索邦’均在接种48 h后出现病斑；最晚出现病斑的是‘萨曼莎’，但其接种后病斑扩展速度与‘索邦’差异不显著。

表1 两种葡萄孢属真菌侵染不同品种百合花和叶片能力比较Table 1 Comparison of infectivity of two Botrytis species on petals and leaves of different Lilium varieties

3 结论与讨论

灰葡萄孢的寄主相当广泛，百合属只是其寄主之一，椭圆葡萄孢则专一性侵染百合。大部分报道认为百合灰霉病病原为椭圆葡萄孢。但是作者认为灰葡萄孢同样是危害百合田间生产的重要病原菌。云南省昆明市常年温度20 ℃左右，气候湿润，非常适宜两种病原菌的侵染与繁殖。研究显示，两种葡萄孢属真菌对不同品种百合花瓣和叶片的侵染能力不同，品种间存在差异；对同一百合品种花瓣和叶片的侵染能力也不同，灰葡萄孢对百合的侵染能力明显强于椭圆葡萄孢。

百合品种‘木门’是由东方百合与喇叭百合杂交获得的品种[8]，是我国引进的百合新品种，但是其抗性评价未做系统研究。引种是丰富我国百合种质资源的重要手段[9—11]，抗病性鉴定是引种后的重要研究内容。本研究发现，‘木门’叶片接种椭圆葡萄孢96 h后仍未出现病斑，花瓣接种48 h出现病斑；‘木门’叶片和花瓣接种灰葡萄孢病斑出现时间和其他品种无差异，表明 ‘木门’对椭圆葡萄孢有一定抗性，对灰葡萄孢则无抗性(图1)。

本研究为百合的引种及田间百合灰霉病的控制提供了科学基础，建议实际生产过程中应在百合不同生育期采取不同防病策略，重点控制灰葡萄孢引起的灰霉病病害。

图1 ‘木门’花瓣和叶片接种灰葡萄孢和椭圆葡萄孢Fig. 1 Petals and leaves of the lily variety ‘Conca D’Or’inoculated by Botrytis cinerea and B. elliptica