传染性造血器官坏死病毒环介导等温扩增检测方法的建立和初步应用

何亚鹏，陈怡静，时 晓，张宝莉，温战华，陈春山，李 博，杜迎春

(1.北京市水生野生动植物救护中心，北京 102100；2.郑州外国语新枫杨学校，郑州450000)

传染性造血器官坏死病(infectious haematopoietic necrosis，IHN)是极易对冷水鱼养殖造成严重危害的鱼类急性全身性传染病，是世界动物卫生组织(OIE)规定必须申报的动物疫病，我国农业部也将其列为二类动物疫病，是第1类鱼类口岸检疫疫病[1]。目前，该病在法国、意大利、德国、英国、日本、韩国、俄罗斯和中国等国家暴发，已形成全球分布；在我国，自1985年东北地区首次报道IHN以来，该病在北京、河北、辽宁、吉林、山东、甘肃、青海、四川、新疆、云南等省、市、自治区均有分布，并有向周围蔓延的趋势[2-4]。IHN的病原为弹状病毒科诺拉弹状病毒属的传染性造血器官坏死病毒(infectious haematopoietic necrosis virus，IHNV)，其病毒形态为子弹状，有囊膜包被[4]。IHNV主要危害鲑鳟鱼类的鱼苗及幼鱼，鱼苗死亡率极高，可达100%[1，3]。

IHN可通过临床和病理诊断进行初步判断，确诊则需要进一步的实验室检测。目前检测IHNV的方法主要病毒分离培养、抗体中和试验、免疫组化法、ELISA以及RT-PCR等方法。这些方法一般费时费力，且对试验平台要求很高，需要一些专业的设备[5-7]。逆转录环介导的等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification，RT-LAMP)节省实验步骤，具有操作简便、快速、特异性强等优点，不需很专业的仪器设备，在水浴锅中即可完成扩增，特别适用于基层及现场快速诊断[8]。本研究针对IHNV的保守序列核蛋白基因N的特定区域设设计3对特异性引物，并在反转录酶和Bst DNA聚合酶的作用下对靶序列进行等温核酸扩增反应，建立了简单、快速、灵敏度高、特异性好的IHNV检测方法，丰富了实验室和现场检测IHNV的手段，对IHN快速诊断及防控具有重要意义。……