蓝舌病病毒10质粒反向遗传操作系统的建立

郭运泽，孙恩成，徐青元，步志高，吴东来*，王凤龙1,*

（1.内蒙古农业大学 兽医学院，内蒙古 呼和浩特 010018；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江 哈尔滨 150069)

蓝舌病是由蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)引起的，导致多种反刍动物及野生动物发病的急性热性疾病。由于该病传播迅速以及其在全球范围内造成的严重经济影响，被世界动物卫生组织(OIE)列为法定通报疾病，在我国也被列为一类动物疫病。由于近年来蓝舌病在欧洲的暴发，且传播范围的不断扩大，蓝舌病的防控已成为我国乃至国际社会关注的重要动物疫病。BTV 是一种隶属于呼肠孤病毒科环状病毒属的虫媒病毒。其基因组由10 条线性化的双链RNA组成。BTV 的病毒粒子呈二十面体对称，无囊膜，直径约为 70 nm～80 nm。BTV 的核酸由10 个基因节段的双股RNA (double-stranded RNA，dsRNA)组成，按长度大小依次命名为 Seg-1～Seg-10。BTV 的 10 个双股 RNA 节段总长度约 19.2 kb，分别编码7 种结构蛋白(VP1～VP7)和4 种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3/NS3A、NS4)[1]。

本研究所采用的10 质粒拯救系统操作过程比现有的体外转录系统简便，可丰富dsRNA 病毒的反向遗传操作系统。同时，该系统为BTV 发病机理等方面的基础研究以及新型疫苗研发方面的应用性研究奠定了一定的基础。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料 亲本病毒BTV-16 BN96/16 株(wtBTV-16)和BHK-21、BSR 细胞均由本实验室保存；携带 BTV-16 BN96/16 株的 Seg-1～Seg-10 的重组质粒pB16-s1～pB16-s10 均由本实验室构建保存；反向遗传操作系统通用载体pS111(图1)由本实验室构建保存[2]；抗 BTV-16 NS2 蛋白的单克隆抗体(MAb)腹水BTV-NS2-1B2 由本实验室制备保存[3]。……