基于重组Erns蛋白的牛病毒性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立

肖盛中，马振国，李 岩，马旭升，李 爽，杨若松，盛金良*

(1.石河子大学 动物科技学院，新疆 石河子 832003；2.北京维德维康生物技术有限责任公司，北京 100095)

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)，为单链正股 RNA 病毒，是黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的代表种，该病毒引起的牛病毒性腹泻—粘膜病发病率高，致死率低，病牛常出现发热、黏膜糜烂溃疡、白细胞减少、腹泻、咳嗽等主要症状，怀孕母牛流产或产出畸形胎儿。目前我国BVDV 感染比较普遍，尤其规模化牛场抗体检出率是散养牛场抗体检出率的6 倍多[1]。BVDV 感染怀孕母畜后造成胎儿免疫耐受进而发展为持续性感染(PI)，PI 胎儿出生后即为 PI 牛。PI 牛常年带毒排毒，是牛群中BVDV 感染的主要传播来源。近年对新疆地区BVDV 抗体和抗原的检测及流行病学调查表明BVDV 感染已在新疆广泛存在，并且根据BVDV 5'-UTR 的高突变性已有研究显示在新疆存在不同基因型的BVDV[2-3]。

Erns(E0 或gp48)是组成病毒的囊膜糖蛋白之一，含有8 个可糖基化位点，去糖基化分子量约27 ku，可以与细胞表面黏多糖特异性结合，且与被感染细胞的可溶性病毒颗粒分泌相关[4]。此外Erns为瘟病毒属特有，具有 RNase 活性，对单链和双链 RNA 的降解具有促进作用，在感染细胞的RNA 合成调控中有着重要影响，可在病毒感染初期削弱宿主的免疫防御[5]。无论是控制BVDV 感染的抗病毒药物研发方面，还是抗体检测方面，Erns蛋白均具有重要意义[6]。本实验通过对新疆地区BVDV 流行株的基因序列分析及Erns结构蛋白抗原优势表位的预测，利用大肠杆菌表达了重组蛋白Erns，建立基于Erns蛋白的 BVDV 间接 ELISA 方法，对新疆地区 BVDV 血清抗体检测和血清流行病学调查具有重要意义。……