大鼠外周血嗜中性粒细胞分离方法的优化改良

王 芸 ,李春晓 ,孙向婉 ,王 鑫 ,赵正午 ,王月明 ,韦东来,刘晓晔,穆 祥,董 虹

[1.北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京昌平102206 ;2.中国农业大学动物医学院,北京海淀100193]

嗜中性粒细胞[1](PMNs)是多形核白细胞的一种,在骨髓中形成待发育成熟后进入血液循环,是机体的固有免疫细胞,参与机体的免疫反应和增强机体的防御作用,其在抵御病原体,控制炎症发生中发挥重要的作用。目前动物细菌性疾病是畜牧业的难点,许多研究表明,PMNs 在细菌引起的一些的免疫反应及炎症等中扮演了重要的角色。近年来对PMNs 的研究越来越多,随着研究的不断深入,提取较纯的PMNs 成为试验的关键步骤。在大多数肉食性动物中,PMNs 占血液白细胞总数的60%～75%,而在牛、绵羊及实验用动物(如大鼠)中仅占20%～30%[1]。以往的研究中分离的大多是人、狗、兔血液中的PMNs,由于这些动物白细胞中的PMNs 比率较大,因此以常规方法分离后,即可获得较高纯度的PMNs。但基础研究中,大鼠是较为常用的实验动物,而大鼠白细胞中的PMNs 比率较低,甚至不到人血的一半,用常规方法提取PMNs 的方法分离大鼠PMNs 获得率较低。

目前从大鼠外周血中分离PMNs 的方法并不成熟,仍以密度梯度离心法为主,主要是利用一种密度介于PMNs 与其他细胞之间而近于等渗的溶液(分层液)做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将PMNs 从外周血中加以分离[2]。其中常用的分层液为Percoll,因为Percoll 扩散常数低,所形成的梯度十分稳定,此外,Percoll 不穿透生物膜,对细胞无毒害,还可将受损的细胞及其碎片与完好的活细胞分离,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒[3-5]。……