用于水生病原菌的3种高通量活菌计数方法的比较*

邹培卓 杨 倩 董 宣 谢国驷 黄 倢①

(1.上海海洋大学水产与生命学院 上海 201306；2.中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛海洋科学与 技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 农业农村部海水养殖病害防治 重点实验室 青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室 青岛 266071)

细菌计数方法是微生物学研究的基础技术，主要分为直接计数法和间接培养计数法。直接计数法主要有显微镜观察法(包括光学显微镜技术、荧光显微镜技术等)和比浊计数法等；间接培养计数法主要有平板菌落计数法(包括传统平板计数法、微菌落技术等)和最大或然数计数法(Most probable number，MPN法，也称为稀释培养法)等(王婷婷等,2008)。传统的直接计数法不能区分细菌的死活，且灵敏度低、线性范围狭窄，间接培养计数法虽然能确定活菌数量，但工作量大，难以对大批量样品进行同时操作。例如，食品安全国家标准中的菌群计数法采用MPN法和平板计数法(GB 4789.3-2010)，这2种方法都需要培养24～48 h，且工作量大、检测线性范围窄，难以进行快速、大批量的检测工作，MPN法的精确性还存在疑问；为了简化检测程序、缩短检测时间，国内外学者进行了大量的快速检测方法的研究，提出了电阻抗检测法、Sim PlateTM全平皿计数法、微菌落技术、最大或然数-聚合酶链式反应计数法(MPN-PCR法)、流式细胞仪测定法等检测方法，取得了一定的成果，但也存在不同的缺陷和不足。例如，流式细胞仪测定法虽然灵敏度、简便性都有了较大的提升，但由于其成本昂贵，且不能区分细菌的死活，在实际应用中受到了很大的制约。……