瘦素/脂联素基因多态性与痰湿质睡眠呼吸暂停相关性研究

严娴婷 顾 亮 杜坚宗 吴文娟 吴海燕 李志军

阻塞性睡眠呼吸暂停（obstructive sleep apnea，OSA）是由于患者睡眠时上气道完全或部分阻塞，导致呼吸暂停和睡眠结构紊乱、引起夜间反复低氧血症和高碳酸血症。根据其临床症状，归属于中医“鼾症”范畴。隋代巢元方《诸病源候论·鼾眠候》首次将鼾症作为一个独立病证，认为痰湿内生是其重要的发病因素。痰湿体质为常见的中医体质类型，是产生“痰湿”这一病理产物的体质因素。迄今为止，瘦素及脂联素同OSA 发生发展的关系已得到广大学者肯定[1-2]。研究发现，OSA 患者血浆瘦素水平随着病情严重而逐渐升高，并且同体质指数、呼吸暂停指数及夜间氧饱和度水平相关[3]。脂联素具有调节糖脂代谢紊乱及改善胰岛素抵抗等作用，目前尚无研究报道痰湿质OSA 患者同瘦素、脂联素基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）的关系。本研究旨在探讨痰湿质OSA 患者同瘦素及脂联素基因SNPs 的关联性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 所有患者均来自浙江省汉族人群，自2014 年12 月—2016 年12 月在浙江医院呼吸睡眠研究中心进行多导睡眠仪（polysomnography，PSG）检测诊断明确为OSA 患者。本研究经医院伦理委员会审核通过。

1.2 OSA 诊断标准 根据《阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征诊治指南（2011 年修订版）》[4]，采用多导睡眠仪监测提示呼吸暂停低通气指数（apnea hypopnea index，AHI）≥5，同时伴有典型的夜间睡眠打鼾伴呼吸暂停、日间嗜睡便可诊断OSA。OSA 病情严重程度判定标准：轻度（15＞AHI≥5 次/分）；中度（30＞AHI≥15 次/分）；重度（AHI≥30 次/分）。

1.3 中医痰湿体质判断标准 根据王琦制定的痰湿体质判定标准[5]：症状为体形肥胖，中脘痞满，口甜黏，身重如裹，大便不实，口干不饮，胸满昏眩，脉濡或滑，舌苔腻等。凡痰湿症状/体征累计积分≥9 分，诊断为痰湿体质；＜9 分者，为非痰湿体质。

1.4 纳入标准 经多导睡眠监测诊断明确的OSA患者和根据中医体质学判定为“痰湿质”、“非痰湿质”患者。所有患者均自愿签署知情同意书后纳入本研究。

1.5 排除标准 （1）未满18 周岁；（2）严重的颌面畸形；（3）存在可能影响血氧饱和度的疾病，如慢性阻塞性肺病、心力衰竭、先天性心脏病等；（4）正在服用影响睡眠的药物，如苯二氮卓类、巴比妥类、镇静剂等；（5）已接受针对OSA 的治疗；（6）多导睡眠仪监测睡眠时间少于5h；（7）存在肿瘤、糖尿病、肝肾功能不全和自身免疫性疾病等。

1.6 指标检测 指标检测操作程序参照文献[6]。所有患者经PSG 检查后抽取静脉血，采用AxyPrep 血液DNA 组提取试剂盒提取外周血DNA；PCR 反应引物由上海生工生物工程有限公司合成（见表1）。利用MassARRAY Assay Design 软件设计出各SNPs的PCR 引物和单碱基延伸引物后，根据PCR 引物进行片段扩增，再进行虾碱性磷酸酶（shrimp alkaline phosphatase，SAP）处理，单碱基延伸反应和产物纯化，根据获取的Tag SNPs 序列，使用Sequenom 公司的飞行时间质谱平台对瘦素、脂联素基因的SNPs 位点进行检测。

1.7 统计学方法 应用SPSS 17.0 软件对实验数据进行统计分析，计算各个SNPs 位点的基因型和等位基因频率，采用Hardy-Weinberg 平衡检验分析瘦素、脂联素基因各位点基因型和等位基因的遗传平衡状态，采用卡方检验检测各组间SNPs 位点基因型和等位基因组的差异性，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 病例特点 本研究总共纳入130 例OSA 患者，其中痰湿质组92 例，非痰湿质组38 例，两组患者性别、年龄、OSA 病情严重程度等资料，差异无统计学意义（P＞0.05），组间具有可比性；痰湿质组体质量超重68 例，正常24 例；非痰湿质组体质量超重21 例，正常17 例，组间比较差异有统计学意义（P=0.023），见表2。

表1 瘦素、脂联素各SNPs 引物序列

表2 两组OSA 患者基本资料比较[例（%）]

2.2 瘦素和脂联素基因各SNPs 位点基因型和等位基因分布情况比较 130 例浙江省汉族OSA 人群，共检测瘦素基因4 个SNPs 位点和脂联素基因5 个SNPs 位点。Hardy-Weinberg 平衡检验结果显示，瘦素和脂联素基因各SNPs 处于遗传平衡状态，无显著偏倚。与非痰湿质OSA 患者比较，痰湿质OSA 患者瘦素基因4 个SNPs 位点和脂联素基因5 个SNPs 位点基因型和等位基因分布差异无统计学意义（P 均＞0.05），见表3-4。由于两组患者体质量分布差异有统计学意义，因此，本研究根据BMI 分层进行亚组分析，结果显示，不论体质量超重亚组、还是正常亚组，痰湿质和非痰湿质OSA 患者瘦素和脂联素基因各SNPs 位点基因型和等位基因分布均差异无统计学意义（P 均＞0.05），见表5-6。

3 讨 论

本研究结果提示，痰湿质及非痰湿质OSA 患者瘦素基因4 个SNPs 位点和脂联素基因5 个SNPs 位点基因型和等位基因分布差异无统计学意义，通过亚组分析也提示不同体质量的两组患者素和脂联素基因各SNPs 位点基因型和等位基因分布差异无统计学意义。

表3 两组阻塞性睡眠呼吸暂停患者瘦素、脂联素基因各SNPs 基因型分布比较[例（%）]

表4 两组阻塞性睡眠呼吸暂停患者瘦素、脂联素基因各SNPs 等位基因分布情况比较[例（%）]

表5 不同体质量痰湿质、非痰湿质OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 基因型分布比较[例（%）]

表5 不同体质量痰湿质、非痰湿质OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 基因型分布比较[例（%）]（续）

表6 不同体质量痰湿质、非痰湿质OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 等位基因分布比较[例（%）]

表6 不同体质量痰湿质、非痰湿质OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 等位基因分布比较[例（%）]（续）

痰湿体质是常见的中医体质类型，是产生“痰湿”这一病理产物的体质因素，“痰”、“湿”是OSA 最常见的病理因素，痰湿壅盛，聚于上焦，阻塞气道，致肺气宣降失常，入夜更甚，故出现夜间打鼾、呼吸暂停及反复憋醒等临床症状。本研究发现，痰湿质OSA 患者占总OSA 患者的70.8%（92/130），同付桂玲等[7]研究结果相类似，付氏等调查中医体质与睡眠呼吸暂停发病的关系，发现痰湿体质的鼾症患者可高达71.7%。

瘦素作为一种调节脂肪代谢的重要因子，目前大量研究证实，相对于正常人群，OSA 患者血浆瘦素水平随着病情严重而逐渐升高，并且同体质指数、呼吸暂停指数及夜间氧饱和度水平相关，而当OSA 病情好转而瘦素水平逐步降低[3]，提示OSA 能引起血浆瘦素水平升高和瘦素抵抗，使瘦素不能正常发挥调节体脂的生理功能，进而促进脂肪沉积于上气道和内脏，并且引起神经功能失调，加重睡眠时呼吸道塌陷甚至闭塞，从而参与OSA 的发病过程，因此研究人员认为瘦素可能是呼吸睡眠紊乱是一种分子标记物[8]。Popko 等[9]研究报道，欧洲人群瘦素基因s1137101 位点多态性同OSA 发病相关。但是本研究提示瘦素基因各SNPs 位点基因型和等位基因在痰湿质和非痰湿质患者中分布差异无统计学意义，通过亚组分析提示两组不同体质量患者瘦素基因各SNPs 位点差异无统计学意义，两组研究得出不一样的结果可能与种族差异有关。

脂联素是一种含有244 个氨基酸的激素，具有调节糖脂代谢紊乱及改善胰岛素抵抗等作用，近年来已成为OSA 的研究热点之一。研究发现，OSA 患者血浆脂联素水平降低，与疾病严重程度和预后相关，随着病情的好转而逐渐恢复正常[2，10]。Nakagawa等[10]发现，同野生型大鼠比较，敲除脂联素基因大鼠肺动脉壁增厚及右心室肥厚更明显，证实脂联素参与OSA 导致的肺动脉重塑及肺动脉高压等病理改变。Cao 等[11]研究发现，相对于脂联素基因276 位点G/T、T/T 型，G/G 型具有更高的风险发展成为OSA。以上研究表明，脂联素及脂联素基因多态性同OSA发病及并发症的发生密切相关。本研究提示，脂联素基因各SNPs 位点基因型和等位基因在痰湿质和非痰湿质患者中分布差异无统计学意义，通过亚组分析提示两组不同体质量患者脂联素基因各SNPs 位点差异无统计学意义。

总之，中医体质（痰湿质和非痰湿质）同瘦素基因及脂联素基因SNPs 位点基因型和等位基因分布无显著相关性。