绵羊Oct4基因的克隆及序列分析

田 丽，时邵辉，胡虹宇，陈胜男，李松美，王春生

（东北林业大学生命科学学院，黑龙江 哈尔滨 150040）

Oct4是POU(Pit-Oct-Unc)结构域的转录因子家族中的一员，由Pou5f1基因编码[1,2]。它一般通过与保守序列的八个碱基“ATGCAAAT”结合，参与调控下游的基因。Oct4作为多能性基因是最早被发现的，主要在受精卵、桑椹胚(morula)、卵裂球、囊胚内细胞团以及着床后胚胎的上胚层(epiblast)和原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)等多能性细胞中表达[3]。例如在小鼠中，将Oct4基因敲除，该胚囊正常植入后不能形成多能性的内细胞团，因此不能正常着床而停滞发育，在着床前期囊胚阶段（胚胎发育3.5～4.5 d）死亡。表明Oct4基因在早期胚胎发育过程中形成多能性细胞是必要的[4]。同时研究表明，在体外培养的ES细胞中Oct4基因受到精确调控，只有当Oct4在一定范围内表达，细胞可保持未分化状态。当Oct4表达量比两倍正常水平还要高时，可导致ES细胞向原始内胚层(primitive endoderm)和中胚层分化；当表达量低于正常水平50%时，ES细胞将会向滋养层（trophectoderm）和原始内胚层分化[5]。但在去除外源性抑制因子的情况下，即使有Oct4基因，ES细胞也会呈现出分化状态，这说明Oct4不是维持ES细胞亚全能分化特性的唯一条件，同时也证明了Oct4在ES细胞中的表达确实经过精确调控，其表达水平决定了ES细胞的命运[6]。Oct4基因不仅在ES细胞培养中发挥重要作用，还是用于产生iPS细胞的大多数转录因子混合物中必需的中心重编程因子[7]。

目前，已经克隆了人[8]、猪[9-11]、牛[12]和小鼠[13]等物种的Oct4基因，与其他动物相比，关于绵羊Oct4基因的相关报道很少。在本……