阿卡斑病毒竞争ELISA抗体检测方法的建立和比较试验

苗海生，李 乐，廖德芳，寇美玲，朱建波，肖 雷，孟锦昕，杨 恒，李华春

(云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室，云南昆明650224)

阿卡斑病(Akabane disease)又名赤羽病，是由阿卡斑病毒(Akabanne virus)引起的主要感染牛、羊及其它反刍动物的一种传染病，主要传播媒介为蚊子、库蠓等吸血昆虫，流行特点具有明显的季节性和区域性。阿卡斑病毒目前分为4 个基因型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)，基因型Ⅰ又分为Ⅰa 和Ⅰb 两个基因亚型[1-3]，该病毒为嗜神经性病毒，感染动物一般不表现体温反应和临床病状，但怀孕动物易发生流产、早产、死胎、胎儿畸形、木乃伊胎、新生胎儿发生关节弯曲和积水性无脑综合征。

由于目前国内所有易感动物均不免疫阿卡斑病疫苗，因此血清学监测方法对于该病的诊断、流行病学调查和评估具有重要意义。国内常用的血清学检测方法包括：中和试验、琼脂扩散试验、补体结合试验、血凝抑制试验。中和试验对试验条件要求高，重复性误差大，不适合普通实验室；琼脂扩散试验、补体结合试验、血凝抑制试验敏感性差，易受其它病毒干扰，使得检测结果不够准确[4-5]。国外公司已经开发出了针对该病的准确、便捷的ELISA检测方法，例如法国ID VET 公司开发的阿卡斑病毒ELISA 抗体检测试剂盒，但在国内售价昂贵。为打破国外对该产品的垄断，提高检测结果的准确性，降低检测成本，本研究利用云南本地分离到的阿卡斑病毒，通过培养、纯化、免疫，制备包被抗原和特异性的多克隆竞争抗体，优化反应条件，建立了阿卡斑病毒竞争ELISA (cELISA)抗体检测方法，并进行了该方法的敏感性、特异性、重复性、与国外同类产品的符合性试验，为阿卡斑病毒抗体检测和流行病学调查提供方法。……