猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2蛋白纳米抗体的筛选及其鉴定

宋 欢，孙明霞，尹 坤，温永俊，刘永刚，蔡雪辉*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨150069；2.中国农业科学院特产研究所，吉林长春130112；3.内蒙古农业大学，内蒙古呼和浩特010018)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是 由 PRRS 病 毒(PRRS virus，PRRSV)引起的病毒性传染病，该病在临床上主要引起母猪流产以及各年龄段猪的呼吸系统疾病，给养猪业造成不可挽回的经济损失[1]。由于PRRSV 具有高度变异性和抗体依赖的增强作用，现有的疫苗并不能给猪群提供完全的免疫保护[2]，因此有必要尝试研究新型抗病毒策略。PRRSV 的非结构蛋白 2 (Nonstructural protein 2，Nsp2)是 PRRSV 最大的非结构蛋白，它的顺式结构和反式结构均具有蛋白酶活性，对病毒的毒力至关重要，是研发抗PRRSV 药物的理想靶标蛋白[3]。

纳米抗体(Nanobody)具有分子量小、结构稳定、可溶性好、特异性强、生产成本低，以及可以识别特殊抗原表位等优点[4]。目前已有针对多种人类病毒纳米抗体的相关报道，研究结果显示其具有良好的临床应用前景，例如针对呼吸道合胞病毒的ALX-0171，是第一个处于临床阶段的抗病毒纳米抗体药物[5]。但在动物病毒疾病中纳米抗体鲜见报道。因此本研究纯化了PRRSV Nsp2 重组蛋白免疫骆驼，利用噬菌体展示技术筛选针对PRRSV Nsp2 的特异性纳米抗体，并对其进行鉴定，为后续PRRSV Nsp2 的研究提供物质基础，为研发新型抗PRRSV药物提供了实验依据。

1 材料与方法

1.1 质粒、菌株和实验动物 pET30a-Nsp2 质粒、鼠抗骆驼IgG 抗血清、PCV2 Cap 重组蛋白和PRRSV Nsp1α 重组蛋白由本实验室制备保存；BL21(DE3)感受态细胞购自Thermo 公司；pCANTAB 5E噬菌体、E.coliTG1 和辅助噬菌体M13KO7 均由西北农林科技大学周恩民教授实验室赠送；……