应用紫外-可见分光光度法测定金刚乙胺

陈国，许秀琴

(宁波市农业科学研究院，浙江 宁波 315101)

在畜牧养殖上，金刚乙胺等抗病毒类药物主要用于鸡禽流感的预防和早期治疗，以及猪传染性胃肠炎的防治，但其致精神异常的副反应以及日增的耐药性对畜产品消费者产生较大的安全风险，同时长期大量使用这些抗病毒类药物会使禽流感的病毒产生变异，给防控工作带来巨大困难，因此，2005年12月金刚乙胺等药物已被禁止使用。然而，仍有一些兽药制剂中非法添加金刚乙胺类药物，最终给人类的健康造成巨大危害。金刚乙胺的测定方法主要集中于高效液相色谱-串联质谱法[1-5]，但检测费用很昂贵，很多小型实验室并不具备这种条件。笔者经过大量研究发现，用紫外-可见分光光度法，利用金刚乙胺溶于氯仿的特性测定金刚乙胺的含量，结果令人满意。

1 材料与方法

1.1 材料

盐酸金刚乙胺对照品(中国药品生物制品检定所，产品编号100969)；盐酸金刚乙胺片(浙江普洛康裕制药有限公司，规格为每片0.1 g)，所用辅料为药用规格，试剂苯二甲酸氢钾、溴甲酚绿、二氯甲烷、氢氧化钠、盐酸均为分析纯，水为超纯水。Blue-Star B型紫外分光光度计(北京莱伯泰科仪器有限公司)。

溴甲酚绿溶液配制。取溴甲酚绿50 mg，加入0.7 mL 0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液溶解，加入50 mL 0.1 mol·L-1邻苯二甲酸氢钾与3.5 mL 0.1 mol·L-1盐酸溶液，用纯水定容至100 mL。

1.2 方法

1.2.1 测定波长选择

称取盐酸金刚乙胺标准品25 mg，用0.1 mol·L-1的盐酸溶液溶解，定容至100 mL，再逐级稀释成1.0 mg·L-1标准储备液；另取金刚乙胺片处方所用辅料，按照上述方法配制辅料溶液。量取标准品储备液2 mL于50 mL离心管中，加5 mL水和3 mL溴甲酚绿溶液，再加入10 mL氯仿，振摇提取5 min，待静置分层后，取氯仿溶液于离心管中，离心10 min，取澄清氯仿液，于320～460 nm波长范围内扫描。

1.2.2 方法学考察

标准曲线绘制。准确量取标准储备液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL于50 mL离心管中，按照1.2.1的测定方法进行操作，在359 nm波长处测定样品的吸光度(Absorbance值)，进行线性回归，回归方程为y=4.268x+0.108，R2=0.999。

稳定性试验。取系列标准溶液中浓度为0.01 mg·L-1的标准品溶液，在359 nm波长处分别间隔1、2、4、8、10、12 h，测定其吸光度。

温度影响试验。取同样浓度为0.01 mg·L-1的标准品溶液，将其温度分别调至20、25、30、35、40 ℃后测定吸光度。

纯度重现性试验。对同一样品同时做6个平行试验，测定盐酸金刚乙胺纯度，按照1.2.1方法对样品进行测试。

加标回收试验。准确称取9份盐酸金刚乙胺各0.2 g，加入不同含量的盐酸金刚乙胺标准品，按照1.2.1方法进行测试。

1.2.3 盐酸乙胺片的测定

称取1片盐酸乙胺片(精确0.000 1 g)样品置于10 mL容量瓶中，用0.1 mol·L-1的盐酸溶液溶解并定容，精密吸取1.0 mL置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，再吸取1.0 mL置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，进行逐级稀释得到中间液，浓度为1 mg·L-1。精密吸取0.2 mL浓度为1 mg·L-1的中间液，按照1.2.1进行同样操作，并于359 nm处进行测定(3批样品，每批平行测定5次，取平均值)，代入回归方程。同时称取辅料0.1 g按照上述样品同样操作，于359 nm处进行测定。

2 结果与分析

2.1 测定波长

经过波长扫描，结果在359 nm波长处有最大吸收，而辅料在该波长处几乎无吸收，故选择359 nm波长为测定波长。

2.2 方法学指标

2.2.1 标准曲线

线性回归表明(图1)，盐酸金刚乙胺在0.01～0.06 mg·L-1浓度范围内线性关系良好。

图1 不同浓度盐酸金刚乙胺与吸光度的线性关系

2.2.2 稳定性

由表1可知，12 h内采用不同时间节点，测定标准液2次，所获7组试验数据均值为0.151，相对标准偏差(RSD)为1.6%。测定结果表明，该标准溶液在12 h内吸光度无明显变化，稳定性良好。

表1 不同时间点测定对吸光度的影响

2.2.3 温度

由表2可知，不同温度条件下，吸光度无明显变化，RSD为0.5%，可见在20～40 ℃内对测定值无影响。

表2 温度对吸光度的影响

2.2.4 纯度重现性

同一样品6个平行试验，纯度测定结果分别为98.4%、98.8%、100.1%、99.7%、101.1%、100.8%，平均纯度为99.8%，RSD为1.1%，表明方法重现性良好。

2.2.5 加标回收率

测试结果见表3。在不同添加水平条件下，平均回收率分别为98.5%、98.6%、98.8%，RSD值在0.4%～0.8%。试验表明，在不同添加水平条件下，回收率试验结果良好。

表3 盐酸金刚乙胺添加回收试验结果

2.3 盐酸乙胺片的测定

测试结果见表4，3批盐酸金刚乙胺样品，每片平均含量分别为0.099 6、0.101 1、0.099 8 g，对应标示量分别为100.0%、100.1%、99.8%。在辅料对比试验中，辅料在359 nm处无吸收峰，排除了辅料对盐酸金刚乙胺测定的干扰。

表4 盐酸金刚乙胺片测定结果

3 小结

本文建立了紫外-可见分光光度法测定盐酸乙胺的含量，方法简便、快捷、准确，在对盐酸乙胺片进行测定时，同时应用该方法对辅料进行了测试，结果发现，辅料对测定结果并不产生影响，应用该方法可实现小型实验室对于盐酸乙胺测定的需求。