日本结缕草ZjNAC2转录激活验证及互作蛋白的初步筛选

姜红岩， 檀鹏辉， 滕 珂， 尹淑霞*， 武菊英*

(1. 北京林业大学草业与草原学院， 北京 100083； 2. 北京草业与环境研究发展中心， 北京 100097)

转录因子能够与基因启动子的顺式作用元件结合来调节基因的表达，从而调控生命活动中的各种信号传导途径[1]。NAC(NAM(No apical meristem)，ATAF(Arabidopsis transcription activation factor)1/2，CUC2(Cup-shaped cytoledon))是植物中所特有的转录因子，在调节植物的生长发育、胁迫响应、次生生长调控及激素信号转导等过程中发挥着重要作用[2-4]。近年来，越来越多的研究不仅仅局限于转录因子本身，对转录因子上下游的调控机制的研究也越来越多。

酵母双杂交是鉴定两个蛋白相互结合的最直接和最广泛的分子生物技术[5]。酵母双杂交系统基于酵母中的一个Gal4转录因子，该转录因子上有两个不同的结构域，一个是转录激活结构域(Activation Domain，AD)，一个是DNA结合结构域(DNA-binding Domain，BD)[1,6]，这两个结构域是互相独立的，只有当这两个结构域在空间上足够接近时，才会激活Gal4的转录活性，从而调控下游报告基因的表达[1,6-8]。若将已知的编码AD分别与待筛选的cDNA文库中不同插入片段相连接，获得‘猎物’载体；BD连接目的基因，获得‘诱饵’载体，共转化酵母细胞[9-10]。当酵母细胞中表达的诱饵蛋白与猎物载体表达的某个蛋白质发生互作，AD与BD就会靠近，报告基因就会表达[10]。通过这一系统，可为在cDNA文库中筛选与目的蛋白结合的上下游蛋白提供可能。目前cDNA文库的构建主要通过SMART、Cap-trapper等技术，通过将某一物种的基因组中的所有基因断裂并转入单独的质粒中，为目的蛋白筛选互作蛋白提供基础。……