202对不孕不育夫妇外周血染色体异常核类型分析

石国西

(南阳市第一人民医院生殖医学科，河南 南阳 473000)

环境污染、工业气体及汽车尾气排放等导致不孕不育发生率呈逐年攀升趋势，据统计，不孕不育在国外发生率为10%～15%，我国发生率约为12.5%，患者总数已超过4000万，如何有效防治不孕不育已成为临床研究的重点[1]。不孕不育与多种因素有关，尤其是染色体疾病，人体细胞含46条染色体，约含100万基因，一旦出现染色体形态异常或数目增减，遗传物质便会失衡[2]，从而引起不孕不育、胚胎停止发育、畸胎等一系列不良后果。本研究选取202对不孕不育夫妇，旨在分析外周血染色体异常核型，为临床防治不孕不育提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年12月至2018年12月于南阳市第一人民医院就诊的202对不孕不育夫妇作为研究对象，年龄20～35岁，平均(27.51±3.03)岁；不孕时间5个月～10年，平均(5.54±1.35)年。均表现为不孕不育、不良妊娠史，患者及家属知晓并签订同意书。排除精神疾病、肝、肾等脏器功能不全、近期参与类似研究、依从性差，无法配合研究者。本研究征得医院伦理委员会审核通过。

1.2 检测方法

1)外周血细胞培养。抽取4 mL外周静脉血，肝素抗凝后，放于1640培养基，37 ℃恒温静止培养68 h。

2)外周血细胞染色体制备。滴加秋水仙素，终浓度为0.1 μg·mL-1，4 h后进行离心处理，弃上清，滴加8 mL(视细胞量多少而定)0.075 mmol·L-1氯化钾溶液，放于37 ℃水浴进行低渗20 min，滴加1 mL固定液(甲醇：冰醋酸=3：1)，混匀预固定后进行离心处理，弃上清，滴加8 mL固定液，10 min后再次离心，重复固定2次，弃上清，滴加适量固定液，配成悬液，冰玻片滴片，放入烤箱1.5 h，G显带。

3)外周血细胞染色体核型分析。每例计数20个核分裂相，于Karyo 3.1分析系统下进行分析，嵌合体及异常核型加倍计数，核型描述以人类细胞遗传学国际命名体制(ISCN)为根据。

1.3 异常染色体评估标准

小Y染色体评定标准：同一核型中Y染色体长度<21号染色体长度；大Y染色体评定标准：同一核型中Y染色体长度≥18号染色体长度。

2 结果

202对不孕不育夫妇中，32例伴有染色体核型异常(均为夫妇一方)，异常率为7.92%(32/404)，其中16例常染色体异常，占50.00%；6例罗宾逊易位，占18.75%；10例性染色体异常，占31.25%。详见表1。

表1 32例外周血染色体异常核类型及临床表现

3 讨论

不育症是指受孕成功，但无法获得存活婴儿。不孕症是指育龄夫妇同居1年及以上，有正常性生活，未采取任何避孕措施情况下，仍未成功怀孕。我国不孕不育发生率已由20年前3%升高至12%，接近发达国家水平[2]。因此，给予不孕不育患者早期诊断，制定可靠预防及治疗措施，对提升生育率意义重大。

既往有研究[3]指出，正常人群中，染色体异常发生率为0.47%～0.84%，不孕不育患者中，染色体异常发生率为0.8%～12.5%，为正常人群15倍左右。本研究202对不孕不育夫妇中，32例伴有染色体核型异常，异常率为7.92%，与上述研究染色体异常率相近，说明染色体异常与不孕不育存在一定关联性。不孕不育患者中，以染色体结构异常较常见，特别是染色体易位，平衡易位患者与正常人结婚所生子女可能从亲代患者接受1条易位衍生染色体，致使某个易位节段多余或缺失，进而破坏基因平衡，导致胎儿畸形发育[4]；罗宾逊易位是常见染色体畸变，包含非同源和同源2种类型，非同源罗宾逊易位携带者可形成6种不同配子，1种平衡易位，1种正常，4种不平衡配子，而同源性罗宾逊易位携带者可形成2种配子，与正常配子结合后会形成单体或三体型合子，进而引起胚胎停育、早期流产[5]。本研究共检出6例罗宾逊易位，分别表现为胚胎停育、反复流产等，说明易位患者虽无严重先天畸形，但子代极易导致自发流产。因此，对于同源罗宾逊易位携带者，临床医师可推荐借精、借卵等辅助生育技术来获得正常后代。

哺乳动物性别取决于性腺性别分化及发育、受精时染色体性别，导致内外生殖器发育，性激素作用下形成表型特征。本研究共检出2例46,XY核型，即性反转，主要特征为染色体性别与性腺性别不一致，经检测其中1例符合不完全型雄激素不敏感综合征，表现为阴茎阴囊型尿管下裂，1例符合完全型雄激素不敏感综合征，此类患者乳腺稍发育，B超下可见始基子宫，卵巢体积较小，大小阴唇及外阴发育较差。同时发现2例47,XXX核型，表现为不良生育史，其发生原因与母亲染色体未分离有关，主要错误发生阶段为第1次减数分裂时期。本研究检出5例47 XXY核型，即克氏综合征，主要特征为表现为体征女性化、睾丸小、睾酮低、四肢修长，分析原因在于，患者双亲中有1个亲代在生殖细胞形成期间发生性染色体不分离，从而导致疾病发生[6]。另外，克氏综合征患者不孕，故无法将其多余性染色体传至后代，能有效避免出生缺陷发生[7]。本研究检出1例47,XYY核型，医学称为超雄综合征，超雄综合征患者较正常男性多1条染色体，分析原因在于，患者父亲生殖细胞第2次减数分裂时，YY并未分离，形成YY精子，进而诱发超雄综合征[8-9]。此类患者因睾丸发育不完全，生精过程出现障碍，生育力降低，表现为少弱精。

鉴于上述分析，笔者提出以下建议：1)若患者伴有外生殖器畸形、性腺异常，需及时进行染色体核型分析，明确诊断，采取相关防治措施；2)确定不孕不育后，需鼓励夫妇共同诊治，利于缓解负性情绪，使其精神得到安慰，或指导其采取听音乐、外出旅游等手段转移对疾病注意力，稳定自身情绪，或介绍既往科室中成功分娩案例，必要时邀请成功分娩案例现身说法，帮助其树立分娩信心，以积极乐观心态面对生活与疾病；同时需保护患者隐私，赢得患者充分信任，利于更好开展诊疗工作。

总之，染色体异常是导致不孕不育危险因素，外周血染色体核型检测对预防出生缺陷发生，提高人口素质意义重大。