养殖大鲵肠道细菌多样性

兰阿峰 郭素芬 彭浩

摘要：纯培养分离大鲵肠道细菌，选用细菌通用引物进行16S rRNA扩增，测序后提交序列并分析;免培养方法采用试剂盒提取肠道内容物总DNA，选用细菌通用引物对总DNA进行16S rRNA扩增，构建克隆文库，对阳性克隆进行PCR-RFLP分析，用Hae Ⅲ内切酶进行片段插入性验证并进行测序，构建系统发育树。纯培养获得103个菌株，分属于16个不同的可操作分类单元（operational taxonomic units，OTUs），系统发育分析表明这些克隆序列分别属于变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）和放线菌门（Actinobacteria）。其中，变形菌门（占克隆总数 87.63%）为最优势类群。免培养结果将随机挑取的105个阳性克隆归为15个OTUs，系统发育分析表明这些克隆序列分别属于变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、放线菌门（Actinobacteria）和拟杆菌门（Bacteroidetes）4个门。其中，变形菌门（占克隆总数的71.43%）为最优势类群。养殖大鲵肠道细菌多样性丰富，具有进一步开发研究的价值。

关键词：养殖大鲵;肠道细菌;纯培养;免培养;多样性

中图分类号： S966.6 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2019）01-0146-06

中国大鲵（Andrias davidianus）别称“娃娃鱼”，属于两栖纲有尾目隐腮鲵科，是现存个体最大的两栖动物，1998年被列为国家二级保护动物[1]。我国大鲵主要分布在陕西、江西、湖北、四川等17个省（区）深山峡谷的溪流当中[1-3]。中国大鲵是肉食性捕食动物，野生大鲵捕食的动物有螃蟹、昆虫、青蛙、鱼等[4-5]。由于大鲵具有极高的经济价值和药用价值，其人工养殖逐渐得到了重视，目前在陕西汉中、四川巴中等地区出现了较大规模的养殖。

动物肠道寄生着大量的微生物，这些微生物同时也是动物体的组成部分，肠道微生物与寄主消化吸收及健康状况密切相关[6-8]。……