阻断PI3K/AKT/mTOR通路增强顺铂诱导的人皮肤黑素瘤细胞株A375凋亡的机制研究

张斌斌 王湘琦 赵超然 熊爱兵

[摘要]目的：本实验探讨抑制PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂诱导人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡作用及其机制。方法：用顺铂处理人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞后Western blot检测细胞凋亡、PI3K/AKT/mTOR通路的活化情况以及细胞增殖-毒性检测试剂盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8）。用PI3K的抑制剂LY294002（LY）和mTOR的抑制剂雷帕霉素（Rapamycin，Rap）分别预处理以研究其对顺铂处理后人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡的协同作用。为进一步探索阻断PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂处理后人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡的协同作用机制，采用Western blot检测阻断PI3K/AKT/mTOR后联用顺铂处理人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞中Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达。结果：顺铂处理后的A375黑素瘤细胞中PARP的活化剪切体表达量水平呈浓度和时间依赖性增加，细胞活力呈浓度和时间依赖性降低（P<0.05）。顺铂处理A375黑素瘤细胞后PI3K/AKT/mTOR通路的活化。阻断PI3K/AKT/mTOR通路再用顺铂联合处理A375黑素瘤细胞后PARP的活化剪切体表达量明显上调以及细胞活力明显降低（P<0.05）。阻断PI3K/AKT/mTOR通路后再用顺铂联合处理A375黑素瘤细胞发现Bcl-2蛋白和Bcl-xl表达水平下调。结论：阻断PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂诱导的细胞凋亡具有协同作用，该协同作用可能与Bcl-2和Bcl-xl蛋白下调有关。

[关键词]PI3K/AKT/mTOR;Bcl-2;黑素瘤细胞;A375;顺铂;凋亡

[中图分类号]R732.2    [文献标志码]A    [文章编号]1008-6455（2019）08-0072-05

黑素瘤（melanoma）是起源于黑素细胞的恶性肿瘤，常发生在皮肤、黏膜等。近年来，黑素瘤的发病率和死亡率正在逐步增加[1-4]。它的发生、发展与紫外线照射时间延长、女性激素、砷化物、酒精、辐射和饱和脂肪等有关[5-6]。目前对于黑素瘤的治疗方案有手术治疗、药物治疗和分子靶向治疗。尽管手术切除治疗黑素瘤是一种有效的手段，但是术后往往容易导致肿瘤的复发、患者生存率不尽人意[7-8]。此外，近年来对于黑素瘤的药物化疗研究逐渐增多，但是由于其肿瘤产生的耐药性、药物化疗效果并不理想，所以有必要探讨新的治疗策略。有研究报道显示，药物化疗与分子靶向治疗在抗肿瘤中具有很好的抑制作用[9-10]。……