胰蛋白酶消化法测定牛胶原蛋白三股螺旋结构的含量

梁健华，梁 杏，李奕恒

广州创尔生物技术股份有限公司，广州 510000

胶原蛋白是脊椎动物细胞外基质中的一个重要组成部分，是哺乳动物中最丰富的蛋白质，约占总蛋白质量分数的20%～30%。由于胶原蛋白具有显著的成纤维结构，良好的生物降解性，优越的生物相容性及较低的抗原性等优点，其已经广泛运用生物医学领域上。天然的胶原蛋白分子由三部分组成：非螺旋氨基末端部分，中心三股螺旋部分和非螺旋羧基末端部分。三股螺旋结构部分是由约为300个重复的“Gly-X-Y”单元组成，其中X通常是脯氨酸(Pro)，Y通常是羟脯氨酸(Hyp)，该重复单元约占总肽链长度的95%以上。胶原蛋白的三股螺旋结构，能使细胞吸附、迁移于胶原蛋白基上，甚至能调节和促进细胞的分化，并有助于维持组织和器官的稳定性和完整性。可见，三股螺旋结构是胶原蛋白生物活性的一个重要标志，是其发挥功能特性的前提[1]。此外，胶原蛋白的三股螺旋结构决定了其物理、化学性能，是胶原蛋白应用于各领域的重要前提，例如利用具有三股螺旋结构胶原蛋白的成纤维能力制备的胶原蛋白海绵，可用于体内止血[2]。然而，天然的胶原蛋白的三股螺旋结构容易受加工环境的影响[3]，在胶原蛋白的生产加工中不可避免会引入物理热[4]、辐照[5,6]、剪切、酸及其他化学试剂[7,8]等，这会对胶原蛋白的三股螺旋结构造成破坏甚至完全破坏，导致其失去天然的生物活性功能，最终影响产品的质量。

目前，胶原蛋白三股螺旋结构的检测方法主要为圆二色谱法(CD)[9]和红外光谱法(FTIR)[10]。……